过氧化物酶(pod)测试方法 |
点击次数:2464 更新时间:2016-10-26 |
过氧化物酶(pod)测试原理: 过氧化物酶催化过氧化氢氧化酚类的反响,产品为醌类化合物,此化合物进一步缩合或与别的分子 缩合,发生颜色较深的化合物。本试验以邻甲氧基苯酚(即愈创木酚)为过氧化物酶的底物,在此 酶存鄙人,H2O2可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚红棕色的物质可用分光光度计在470nm处测定其消光值,即可求出该酶的活性。 试验准备: 仪器:分光光度计、离心机、秒表、天平、研钵、磁力搅拌器 试剂:愈创木酚、30%H2O2、0.2mol/L磷酸缓冲液(7.8)、0.1mol/L磷酸缓冲溶液(PH6.0,见附录) 反应混合液[100mmol/L磷酸缓冲溶液(PH6.0)50ml,参加愈创木酚28μl,于磁力搅拌器上加热搅 拌,直至愈创木酚溶解、待溶液冷却后,参加(待溶液冷却后再参加,不然导致分解)30%H2O2 19μl,混合均匀,保留于冰箱中。 实践的构成和装备: 试剂一:液体60ml×4瓶,4℃保留6个月 试剂二:粉剂×3瓶,4℃保留6个月 试剂二使用液的装备:临用每瓶粉剂参加10ml的双蒸水溶解,4℃避光保留 试剂三:液体5ml1瓶,4℃保留6个月 试剂三使用液的制造:临用前用双蒸水15倍稀释,使得1cm光径,双蒸水调零时A240保持在0.4摆布,现用现配。若A值太高,则加双蒸水稀释,若A值太低,则参加适量试剂三。(通常在25倍摆布稀释) 试剂四:液体50ml×2瓶,4℃保留6个月。 说明书: (1)检查的成果没有吸光度值或吸光度值很低
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