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组织脂质比色法定量检测试剂盒
点击次数：1768 更新时间：2017-01-18
 

组织脂质比色法定量检测试剂盒

产品说明书

 

主要用途

 

组织脂质比色法定量检测试剂是一种旨在通过脂溶性偶氮染料油红O特异性地使组织细胞内中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白显示红色或深红色，在分光光度仪上进行比色分析，而获得组织样本脂质定量信息的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体组织样本。用于组织成脂细胞定性、组织细胞病理学分析（脂质细胞瘤；LIPOID）等研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰。

 

技术背景

 

脂类物质（LIPIDS）是一类脂溶性（疏水性）的自然分子，包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇类（STEROL）物质，例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用，是膜结构的组成成分和细胞信号分子。油红O（OIL RED O），又称为27号红色溶剂（SOLVENT RED 27）、苏丹红5B（SUDAN RED 5B），是优于氢醇染料溶剂（HYDROALCOHOLIC DYE SOLVENT）的脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式为XX，分子量为XX。染色显示组织细胞脂类物质呈红色或深红色。在分光光度仪或酶标仪上（520nm波长）可以进行定量分析脂质含量。

 

产品内容

 

清理液（Reagent A）    XX毫升

裂解液（Reagent B）  XX毫升

染色液（Reagent C）  XX毫升

溶解液（Reagent D）  XX毫升

产品说明书  1份

 

保存方式

 

保存染色液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在室温下；试剂具有挥发性，确保瓶盖密闭；染色液（Reagent C），避免光照；有效保证6月

 

用户自备

 

15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器

1.5毫升离心管：用于样品处理的容器

DOUNCE匀浆器：用于裂解组织

微型台式离心机：用于样品操作

比色皿：用于比色分析的容器

分光光度仪：用于定量检测细胞脂质含量情况

 

 

实验步骤

 

  • 样品准备

 

  • 手术取出动物组织，并秤重以确定50毫克组织重量  
  • （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
  • （选择步骤）加入XX毫升清理液（Reagent A）清洗1次
  • 即刻用刀片切碎组织
  • 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
  • 加入XX毫升预冷的裂解液（Reagent B）
  • 涡旋震荡5秒，充分混匀
  • 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器
  • 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下） 
  • 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管
  • （选择步骤）移取10微升进行蛋白定量检测
  • 放进冰槽里待测

 

  • 测定准备

 

  • 准备好待测样品，置于冰槽里备用
  • 设定好分光光度仪：520nm波长，并置零

 

  • 背景对照

 

  • 移取XX微升裂解液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管
  • 加入XX微升染色液（Reagent C）
  • 室温下孵育15分钟，避免光照
  • 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g
  • 小心抽去上清液
  • 加入XX毫升裂解液（Reagent B）
  • 轻度涡旋震荡
  • 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g
  • 小心抽去上清液
  • 重复实验步骤6至9二次
  • 加入XX毫升溶解液（Reagent D）
  • 轻度涡旋震荡，混匀
  • 室温下孵育30分钟，避免光照
  • 转移到比色皿
  • 即刻放进分光光度仪（520 nm波长）：获得背景对照吸光读数（OD）

 

  • 样品测读

 

  • 移取100微升上述制备的待测样品到新的1.5毫升离心管
  • 加入XX微升染色液（Reagent C）
  • 室温下孵育15分钟，避免光照
  • 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g
  • 小心抽去上清液
  • 加入XX毫升裂解液（Reagent B）
  • 轻度涡旋震荡，混匀颗粒群
  • 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g
  • 小心抽去上清液
  • 重复实验步骤6至9二次
  • 加入XX毫升溶解液（Reagent D）
  • 轻度涡旋震荡，混匀颗粒群
  • 室温下孵育30分钟，避免光照
  • 转移到比色皿
  • 即刻放进分光光度仪（520 nm波长）：获得待测样品吸光读数（OD）
  • 实际吸光读数（OD）：待测样品吸光读数—背景对照吸光读数
  • 构建组织样品脂质定量曲线：横座标（x轴）为组织蛋白含量、组织重量、时间点或药物处理浓度等；纵坐标（y轴）为实际样品吸光读数（OD）

  

注意事项

 

  • 本产品为20次操作
  • 操作时须戴手套
  • 试剂具有挥发性，务必密封保存
  • 染色液（Reagent C）避免－20℃低温保存，否则出现沉淀
  • 如果染色液（Reagent C）出现沉淀，须过滤后再使用
  • 染色时，避免光照
  • 如果没有520nm波长的滤波器，可以使用490nm波长替代
  • 本公司提供系列脂质检测试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定检测敏感