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干细胞成脂分化潜力比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
干细胞成脂分化潜力比色法定量检测试剂是一种旨在通过脂溶性偶氮染料油红O 特异性地使细胞内脂滴显
示红色或深红色，在分光光度仪上进行比色测定，以分析脂肪细胞分化和脂肪组织形成程度的而经典
的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物干细胞的成脂细胞分析。
产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰。
技术背景
胚胎干细胞来自于胚囊（blastocyst），其具有分裂和自我复制的能力，以及分化（differentiation）成为肌肉
细胞、神经细胞，以及其它非特定类型（unspecialized）细胞等潜力。干细胞或模式细胞的成脂细胞分化潜
力，即由一系列形态和生化方面的变化而产生脂滴的过程，作为研究脂肪组织形成的分子基础和信号通路，
以及肥胖症的发生和发展的机制的模式系统。油红O（OIL RED O），又称为27号红色溶剂（SOLVENT RED
27）、苏丹红5B（SUDAN RED 5B），是优于氢醇染料溶剂（HYDROALCOHOLIC DYE SOLVENT）的脂溶
性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式为C26H24N4O，分子量为408.51。通过经典的油红O
染色脂滴（成脂分化的标志）为红色或深红色。在分光光度仪或酶标仪上（520nm波长）进行测定，来定
量分析脂肪细胞分化和脂肪组织形成的程度。
产品内容
清理液（Reagent A） 20 毫升
固着液（Reagent B） 20 毫升
净化液（Reagent C） 20 毫升
染色液（Reagent D） 10 毫升
溶解液（Reagent E） 5 毫升
产品说明书1 份
保存方式
保存染色液（Reagent D）在4℃冰箱里，其余的保存在室温下；确保瓶盖密闭。染色液（Reagent D），避
免光照，有效保证6 月
用户自备
显微镜：用于观察细胞脂滴染色
平式摇荡仪：用于染色萃取的混匀
比色皿或酶标板：用于比色分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于定量检测成脂细胞
实验步骤
1． 小心抽掉多孔细胞培养板里的培养液
2． 轻轻加入适量的清理液（Reagent A）到每个培养孔里（见下表）
3． 小心抽去清理液
4． 小心加入适量的固着液（Reagent B）到每个培养孔里（见实验步骤2 表）
5． 室温下孵育10 分钟
6． 小心抽去固着液
7． 小心加入适量的净化液（Reagent C）到每个培养孔里（见实验步骤2 表）
8． 小心抽去净化液
9． 小心加入适量的染色液（Reagent D）到每个培养孔里（见下表）
10．在室温下静置15 分钟
11．小心抽去染色液
12．小心加入适量的净化液（Reagent C）到每个培养孔里（见实验步骤2 表）
13．小心抽去净化液
14．重复实验步骤12 和13 二次，或净化液不再显示粉红色
15．（选择步骤）置于一般光学显微镜下观察染色：脂滴（LIPID DROPLET）呈现深红色
16．小心加入适量的溶解液（Reagent E）（见下表）
17．轻轻摇动培养板，直到溶解液（Reagent E）均匀分布
18．置于平式摇荡仪，在室温下，孵育30 分钟，速度为50RPM
19．（选择步骤）移入到比色皿
20．即刻放进分光光度仪或酶标仪测读，波长为520 nm
21．构建成脂细胞定量曲线：横座标（x 轴）为细胞浓度（细胞量）；纵坐标（y 轴）为样品读数（吸光单
位OD 值）
注意事项
1． 本产品为20 次（24 孔板）、50 次（48 孔板）、100 次（96 孔板）操作
2． 操作时须戴手套
3． 试剂瓶务必密封保存
4． 染色液（Reagent D）避免－20℃低温保存，否则出现沉淀
5． 如果染色液（Reagent D）出现沉淀，须过滤后再使用
6． 染色时，避免光照
7． 细胞染色前后的清洗过程中，小心操作，以免将细胞冲洗掉，而影响定量分析
8． 如果没有520nm 波长的滤波器，可以使用490nm 波长替代
9． 本公司提供系列脂质检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定着色清晰