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细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
磺酰罗丹明B（Sulforhodamine B）细胞繁殖与毒性定量检测试剂是一种旨在通过使用蛋白结合性红色染料，即比色法定量测定细胞内总蛋白质合成率，以评价活体细胞繁殖的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适用于各种药物、化学、环境因子和营养因子处理的贴壁生长中的动物或人体细胞。替代传统的同位素[3H]-thymidine检测的佳选择。产品严格无菌，即到即用，简捷敏感，性能稳定，显色清晰。
技术背景
作为蛋白质染色剂之一的磺酰罗丹明B（Sulforhodamine B），又称酸性红52（Acid Red 52），是一种阴离子染料，与蛋白质静电（electrostate）结合，在540nm波长下产生吸收峰：吸光值与细胞量成线性正相关。
产品内容
固着液（Reagent A） 毫升
清理液（Reagent B） 毫升
染色液（Reagent C） 毫升
酸性液（Reagent D） 毫升
溶解液（Reagent E） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在室温下，染色液（Reagent C）避免光照，有效保证6月
用户自备
*细胞培养液：用于悬浮细胞的混匀
15毫升锥形离心管：用于悬浮细胞操作的容器
比色皿：用于细胞染色比色的容器
台式离心机：用于沉淀细胞
平式摇荡仪：用于混匀染料
分光光度仪或酶标仪：用于定量检测染色后的细胞
实验步骤
一、 贴壁细胞检测
1． 准备96孔细胞培养板的待测细胞 
2． 到规定的检测时间点，从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板
3． 小心加入50微升预冷的固着液（Reagent A）到含有200微升细胞培养液的96孔板中每一个孔里（注意：每孔中的培养液需200微升）
4． 放进4℃冰箱里，孵育1小时
5． 小心抽去含有固着液（Reagent A）的细胞培养液
6． 小心加入xx微升清理液（Reagent B）
7． 小心抽去清理液
8． 重复实验步骤6至7二次
9． 小心加入xx微升染色液（Reagent C）
10．室温下孵育30分钟，避免光照
11．小心抽去染色液
12．小心加入xx微升酸性液（Reagent D）
13．快速抽去酸性液（注意：参见注意事项8）
14．重复实验步骤12至13一次（注意：确保培养孔中无任何液体残留；注意事项6）
15．加入xx微升溶解液（Reagent E）
16．置放在平式摇荡仪上，室温下孵育5分钟，速度为50RPM，避免光照
17．即刻放进酶标仪里测读：波长540nm，参考波长690nm
18．实际吸光读数＝OD540－OD600
19．绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（A）；横坐标（X轴）为细胞数或时间点或药物浓度
二、 悬浮细胞检测
1． 准备待测的悬浮细胞
2． 到规定的检测时间点，转移到15毫升锥形离心管
3． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
4． 小心抽去上清液
5． 加入200微升用户自备的*细胞培养液
6． 小心加入50微升预冷的固着液（Reagent A），混匀
7． 放进4℃冰箱里，孵育1小时
8． 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
9． 小心抽去含有固着液（Reagent A）的细胞培养液
10．小心加入xx微升清理液（Reagent B），混匀
11．放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
12．小心抽去清理液
13．重复实验步骤10至12二次
14．小心加入xx微升染色液（Reagent C），混匀
15．室温下孵育30分钟，避免光照
16．放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
17．小心抽去染色液
18．小心加入xx微升酸性液（Reagent D）
19．放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
20．小心抽去酸性液
21．重复实验步骤18至20一次（注意：确保无任何液体残留） 2
22．加入xx微升溶解液（Reagent E），混匀
23．平放在平式摇荡仪上，室温下孵育5分钟，速度为50RPM，避免光照
24．即刻转移到比色皿
25．放进分光光度仪仪里测读：波长540nm，参考波长690nm
26．实际吸光读数＝OD540－OD600
27．绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（A）；横坐标（X轴）为细胞数或时间点或药物浓度
注意事项
1． 本产品为100次操作
2． 操作时须戴手套
3． 整个操作须无菌操作
4． 如果染色液（Reagent C）出现沉淀，建议过滤后，再使用
5． 建议检测96孔板里的细胞量小于106
6． 建议使用有培养液但无细胞作为背景空对照：样品读数－背景空对照读数
7． 每孔中的培养液需200微升，注意周边培养孔的液体蒸发
8． 孵育时，须避光
9． 使用酸性液（Reagent D），需快速进行，以免染料漏出胞外
10．细胞浓度过高，可以使用波长490至530nm
11．如果用户没有匹配的波长，可以使用波长490nm至560nm之间的任一波长替代
12．本公司提供系列细胞繁殖检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定显色清晰