技术文章Article 首 页 > 技术文章 > 各种动物外周血中性粒细胞分离液试剂盒说明书
各种动物外周血中性粒细胞分离液试剂盒说明书
点击次数:207 发布时间:2021-08-04
 

各种动物外周血中性粒细胞分离液试剂盒

规格:200 mL/kit

保存:本产品对光敏感,应该室温避光储存,保质期 2 年。无菌开封后,保存于室温。

试剂盒组成: 

试剂A 200mL

试剂C 100mL

细胞洗涤液 200mL

红细胞裂解液 100mL

操作步骤: 

1. 取新鲜抗凝全血,血液体积小于5mL时,在离心管中先加入4mL试剂A,后将2mL试剂C小心叠

加于试剂A之上,形成梯度界面(血液体积大于等于5mL,试剂A与试剂C比例2:1,试剂总量与稀

释后的样本量相等。但二者的总体积不能超过离心管的三分之

二,否则会影响分离效果),将血液平铺到分离液液面上方,

注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,

然后将血液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将

形成明显的分层界面。如果样品较多,加样的时间较长,在离

心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。)

2. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(血液的体积

越大所需的离心力越大,离心时间越长,最佳的分离条件需摸

索,离心转速最大不超过1200g)。

3. 离心后,离心管中将出现两层环状乳白色细胞层,上层细

胞为单个核细胞层,下层细胞为中性粒细胞层,如图所示(个

体差异或者是分离条件不同,粒细胞层可分离不明显)。

4. 用吸管小心吸取试剂C与试剂A之间以及试剂A中的中性

粒细胞到15mL洁净的离心管中,10mL PBS或细胞洗涤液洗涤

细胞。250g,离心10min(如有红细胞混杂则加入适量红细胞

裂解液)。

5. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心

10min。

6. 重复步骤6

7. 弃上清,细胞重悬备用。

注意事项: 

A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免

微生物污染。。

B. 分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是

分离示意图

血浆层

单个核细胞层

试剂 C

试剂 A

红细胞层

中性粒细胞层

 

温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。

C. 血液样本最好为新鲜抗凝血(采血2 h以内),为保持淋巴细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。

D. 血液样本不需稀释,直接进行分离即可。

E. 稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,

大大降低细胞得率及纯度。

F. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。

G. 血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸

索最佳的分离条件。

H. 如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在收集血液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生

物污染。

I. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提

供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。