抗坏血酸含量测定试剂盒说明书

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

规格：100T/96S

产品内容：

提取液：液体120ml×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体6ml×1 瓶，4℃保存； 试剂二：液体5ml×1 瓶，4℃保存； 试剂三：液体6ml×1 瓶，4℃保存；

标准品：粉剂10mg×1 瓶（避光），4℃保存。（称取1mg加入10ml提取液，即为100μg/ml标准品）

试验中所需的仪器和试剂：

研钵、冰、低温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

产品说明：

AsA 。AsA 是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用， 也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。

抗坏血酸具有较强还原能力将Fe3+还原成Fe2+，邻二氮菲与Fe2+会形成红色螯合物，在534nm处具

有强的吸收法，且吸光值与反应液中抗坏血酸含量呈正比。

操作步骤：

一、样品的前处理：

(1) 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入1ml提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

(2) 细菌、真菌：按照细胞数量（10个）：提取液体积（ul）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g，4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。

(3) 血清等液体：按照样本体积（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1ml 样本，加入1ml提取液）进行混匀。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

二、测定操作表：

1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 534nm，提取液调零。

2. 测定前将所有试剂 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min 以上。

3. 标准曲线的绘制及样本测定（按顺序加入下列试剂）

充分混匀，室温静置 15min 后，534nm 处测定各管吸光值。如底部有沉淀，离心后再读数三、抗坏血酸含量计算

根据标准曲线，将样品△A 带入公式中（x），计算出样品浓度 y（μg/mL）。1.按蛋白浓度计算

抗坏血酸（μg / mg prot）=y×V 样÷（V 样×Cpr） 2.按样本鲜重计算

抗坏血酸（μg /g 鲜重）= y×V 样÷(V 样÷V 样总×W) 3.按细胞数量计算

抗坏血酸（μg /106cell）= y×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量) 4.按体积计算

抗坏血酸（μg /ml）=10y

V 样总：上清液总体积，mL；V 样：加入反应体系中上清液体积；W：样品质量，g ；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；细胞数量：以 106 为单位计量；T：样本稀释倍数。

注意事项：

1、样品处理需匀浆*，抗坏血酸易分解，需避光保存

2、标准品：现配现用。

3、若不确定样品中 抗坏血酸 含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。

4、因为提取液中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。