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主要用途

石蜡切片神经组织髓鞘（myelin sheath）加利亚斯（GALLYAS）银染试剂是一种旨在标准化的化学分离石蜡方法和胶体银结合技术，分析存档中的石蜡包埋的组织切片中神经髓鞘质（myelin）或髓鞘质包裹的神经纤维等而经典的技术方法。该技术经过精心改良加利亚斯（GALLYAS）银染方法、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋的脑组织或外周神经组织切片的神经髓鞘质及其相关纤维组织检测。广泛用于脑理生理解剖学的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

髓鞘是白色脂肪、无生命的物质存在于神经纤维周围形成一个绝缘和保护作用的鞘。意大利科学家加利亚斯（GALLYAS）于1979年发明了神经组织髓鞘浸银染色技术，基于胶体银与髓鞘的结合，呈现金黑色染色效果。

产品内容

固着液（Reagent A）               毫升

 脱蜡液（Reagent B）              毫升（自备）

补水液A（Reagent C）          毫升

补水液B（Reagent D）          毫升

补水液C（Reagent E）          毫升

清理液（Reagent F）           毫升

净化液（Reagent G）           毫升

澄清液A（Reagent H1）          毫升

澄清液B（Reagent H2）          毫升

澄清液C（Reagent H3）              毫升

澄清液D（Reagent H4）          毫升

银染液（Reagent I）           毫升

酸性液（Reagent J）               毫升

显色液A（Reagent K1）          毫升

显色液B（Reagent K2）           毫升

显色液C（Reagent K3）           微升

终止液（Reagent L）            毫升

去色液（Reagent M）            毫升

稳定液（Reagent N）            毫升

产品说明书                1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保证3月

用户自备

无菌手术刀和镊子：用于解剖动物脑组织

小型玻璃染色缸或60毫米玻璃培养皿：用于组织或切片处理的容器

切片机：用于组织切片

明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片

中性树脂：用于切片封片

光学显微镜：用于切片染色后观察分析

实验步骤

一、 样本预处理

1． 常规麻醉动物和手术（建议：使用用户自备的0.1摩尔食物磷酸缓冲液由心脏处灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清）

2． 使用适量的用户自备的4%多聚甲醛灌注处理

3． 即刻小心取出脑组织

4． 小心放进xx毫升固着液（Reagent A）里

5． 室温下浸泡孵育1周至1月（注意：密闭容器，避免干枯）

6． 用绵纸吸干组织块

7． 即刻进行常规20％蔗糖脱水（注意：组织沉底即可）和常规石蜡处理后包埋（注意：如果石蜡切片效果欠佳，建议直接使用振动切片为佳）

8． 取出组织块，进行缓慢石蜡切片，为30至50微米（范围5至100微米）厚，并铺片在明胶化载玻片上

二、 脱蜡处理

1． 取出10片待测的30至40微米厚的石蜡包埋的组织切片 

2． 按下表依次放进小染色缸里孵育

5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

三、 样本染色处理

实验开始前，移取xx毫升显色液A（Reagent K1）、xx毫升显色液B（Reagent K2）和xx微升显色液C（Reagent K3）到2.2毫升离心管里，混匀后，标记为显色工作液（注意：可以进行10次显色操作。须根据具体用量新鲜配制，不宜久存），避光。然后进行下列操作。

1． 小心加上xx微升净化液（Reagent G）在切片上，覆盖样品表面

2． 室温下孵育30分钟

3． 小心抽去净化液

4． 小心加上xx微升澄清液A（Reagent H1）在切片上，覆盖样品表面

5． 室温下孵育2分钟

6． 小心抽去澄清液A

7． 小心加上xx微升澄清液B（Reagent H2）在切片上，覆盖样品表面

8． 室温下孵育2分钟

9． 小心抽去澄清液B

10． 小心加上xx微升澄清液C（Reagent H3）在切片上，覆盖样品表面

11． 室温下孵育2分钟

12． 小心抽去澄清液C

13． 小心加上xx微升澄清液D（Reagent H4）在切片上，覆盖样品表面

14． 室温下孵育2分钟

15． 小心抽去澄清液D

16． 小心加上xx微升银染液（Reagent I）在切片上，覆盖样品表面

17． 室温下孵育45分钟，避免光照

18． 小心抽去银染液

19． 小心加上xx微升酸性液（Reagent J）在切片上，覆盖样品表面

20． 室温下孵育2分钟

21． 小心抽去酸性液

22． 重复实验步骤19至21二次

23． 放进6孔板的一孔里

24． 加入xx毫升固着液（Reagent A）

25． 室温下浸泡孵育1周至1月，避免光照

26． 小心加上xx微升酸性液（Reagent J）在切片上，覆盖样品表面

27． 室温下孵育2分钟

28． 小心抽去酸性液

29． 重复实验步骤26至28一次

30． 小心加上200微升上述配制的显色工作液在切片上，覆盖样品表面

31． 室温下孵育15至60分钟，或直至背景呈现金黄色，避免光照

32． 小心抽去显色液

33． 小心加上xx微升终止液（Reagent L）在切片上，覆盖样品表面

34． 室温下孵育2分钟

35． 小心抽去终止液

36． 小心加上xx微升去色液（Reagent M）在切片上，覆盖样品表面

37． 室温下孵育10秒，或观察背景褪色程度（注意：不宜过度褪色）

38． 小心抽去去色液

39． 小心加上xx微升稳定液（Reagent N）在切片上，覆盖样品表面

40． 室温下孵育1分钟

41． 小心抽去稳定液

42． 使用用户自备的无离子水清洗3次

43． 透明处理

44． 放上盖玻片或封片（中性树脂）

45． 即刻在一般光学显微镜下观察：神经髓鞘质或髓鞘质包裹的神经纤维呈现金黑色

 银染试剂盒