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细菌核糖体（ribosome）分离试剂盒产品说明书

主要用途

细菌核糖体（ribosome）分离试剂是一种旨在通过化学破膜以及差速超速离心处理方法，分离出完整而纯化的70S核糖体组分的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种培养或临床细菌菌株核糖体成分的分离。产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶和蛋白酶污染，萃取纯度和产量皆高。 

技术背景

核糖体（ribosome）是一种细小颗粒的核糖蛋白复合物（ribonucleoprotein complex），生命细胞制造蛋白质的非膜性结构元素和转译装置（translational apparatus），由RNA和蛋白质组成，具有多肽转移酶的活性，刺激RNA合成，并调节RNA、核糖体自身以及蛋白质的生物合成。其分成2个亚体：大亚体和小亚体。核糖体通过大亚体结合转运核糖体（tRNA），而小亚体结合信使RNA（mRNA），然后阅读RNA提供的信息，转译（translation）成氨基酸，连接成蛋白分子。真核生物的核糖体位于胞浆（游离核糖体）、线粒体和叶绿体中。其中胞浆核糖体为80S核糖体，由40S小亚体和60S大亚体组成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亚基和49个蛋白组成；而40S由18S RNA和33个蛋白组成。线粒体和叶绿体核糖体与原核生物相似，为70S核糖体，由30S小亚体和50S大亚体组成：50S包括5S、23S RNA和34个蛋白；30S包括16S RNA和21个蛋白。细菌核糖体成为抗菌药物的靶标，其中50%以上抗菌素针对细菌核糖体。同时核糖体高度进化保留，成为种系分类（phylogenetic classification）的分子标志。   

产品内容

裂解液（Reagent A）           毫升

保存液（Reagent B）           毫升

产品说明书              1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器

台式离心机：用于样品操作

超速离心机：用于样品操作

超声仪：用于裂解细胞

涡旋震荡仪：用于混匀

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的试剂置于冰槽里冻融备用。然后进行下列操作。

1． 准备50毫升细菌（OD600=0.2或10⁸细胞/毫升）

2． 转移到50毫升锥形离心管

3． 放进台式离心机离心30分钟，速度为3000g

4． 小心抽去上清液

5． 加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent A）

6． 涡旋震荡15秒，充分混匀

7． 超声处理100瓦功率，20秒一次重复4次

8． 置于冰槽里孵育30分钟，期间每隔5分钟涡旋震荡15秒

9． 放进4℃台式离心机离心15分钟，速度为15000g

10． 小心移取上清液到新的高速离心管

11． 放进超速离心机离心15分钟，速度为30000g

12． 小心移取上清液到新的高速离心管（注意：可以使用矿物油填满离心管）

13． 放进4℃超速离心机离心2小时，速度为100000g

14． 小心取出离心管 

15． 小心抽去上清液

16． 加入500微升或xx毫升保存液（Reagent B），混匀颗粒群

17． 转移到新的1.5毫升离心管

18． （选择步骤）进行核糖体定量测定 

19． 放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里准备后续操作

注意事项

1． 本产品为20次操作（5 X 10⁹细胞/次）  

2． 建议使用足够的细菌量

3． 样品操作均须在4℃或以下状态下进行

4． 操作时，须无菌操作，避免污染母液

5． 核糖体定量计算公式（微克/微升）： A260 ¸ 11.1

6． 如果进行核糖体蛋白萃取，建议使用纯化核糖体蛋白质萃取试剂盒—HL16041

7． 本公司提供系列核糖体分析技术产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定分离的核糖体维持正常活性

3． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶