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特殊石蜡切片总胆固醇（酯酶法）菲律宾（FILIPIN）荧光直接染色试剂盒

产品说明书

主要用途

特殊石蜡切片总胆固醇（酯酶法）菲律宾（FILIPIN）荧光直接染色试剂是一种旨在通过特殊脱蜡处理，进

而使用胆固醇酯酶水解和荧光染料菲律宾（FILIPIN）特异性与游离胆固醇反应，形成复合体，并产生蓝色

荧光，分析石蜡包埋组织切片中总胆固醇的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明

的。主要适用于各种人体和动物组织石蜡切片中总胆固醇的检测。广泛用于组织病理生理的研究。产品严

格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。 技术背景

胆固醇（cholesterol）是一类称之为固醇类（sterols）或聚类异戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）

的多环化合物（polycyclic compound）。其分子式为 cholest-5-en-3β-ol。胆固醇以游离（free form）和脂化结

合（ester）两种形式广泛存在于所有动物组织中，主要以非脂化形式存在于细胞膜中。在膜功能和脂代谢

以及激素合成中起着重要作用。菲律宾（FILIPIN）是一类由四种同分异构体的多烯抗生素（polyene

antibiotics）或多马霉素（polyene macrolide）的总称。源自于 S. FILIPINENSIS 细菌的培养液中。其分子式

为 C35H58O11，分子量为 654.8。首先在胆固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化胆固醇（cholesterel ester）转化为游离胆固醇，然后使用菲律宾与所有游离胆固醇结合形成聚集体或复合物，产生荧光。由于

石蜡包埋的组织切片在去石蜡的过程中，有机溶剂诸如二甲苯等容易破坏和减少组织中的脂质成分，因此

使用非二甲苯类脱蜡，以保护组织中的胆固醇成分是菲律宾染色的关键。 产品内容

脱蜡液（Reagent A） 20 毫升

净化液（Reagent B） 5 毫升

清理液（Reagent C） 20 毫升

水解液（Reagent D） 4 毫升

抗干扰液（Reagent E） 4 毫升

染色液（Reagent F） 2 毫升

产品说明书 1 份

保存方式

保存水解液（Reagent D）和染色液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；

有效保证 6 月

用户自备

荧光显微镜：用于样品染色后观察分析

实验步骤

一、 脱蜡处理

1． 取出待测的 6 微米厚的石蜡包埋的组织切片

2． 放进 80℃烘箱，孵育 30 分钟

3． 取出组织切片

4． 小心加上 500 微升脱蜡液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：使用前，摇匀脱蜡

液）

5． 放进 70℃恒温培养箱里孵育 5 分钟

6． 即刻小心移去切片上的脱蜡液（Reagent A）

7． （选择步骤）重复实验步骤 2 至 4 一次

8． 小心加上 200 微升净化液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面

9． 室温下孵育 2 分钟

10．小心移去切片上的净化液（Reagent B）

11．进一步依次常规净化处理：用户自备的 100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇

12．小心加上 200 微升清理液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面

13．室温下孵育 3 分钟

14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）

三、样本染色处理

1． 小心加入 200 微升水解液（Reagent C），铺满整个样品表面

2． 室温下孵育 1 小时（注意：可以延长至 4 小时，避免干枯）

3． 小心移去水解液（Reagent D）

4． 小心加入 200 微升清理液（Reagent C），清洗样品表面

5． 小心移去清理液（Reagent C）

6． 重复实验步骤 4 至 5 一次

7． 小心加上 200 微升抗干扰液（Reagent E），铺满整个切片样品表面

8． 室温下孵育 10 分钟

9． 小心移去切片上的抗干扰液（Reagent E）

10．小心加上 100 微升染色液（Reagent F），铺满整个切片样品表面

11．室温下孵育 30 分钟，避免光照

12．小心移去切片上的染色液（Reagent F）

13．小心加上 200 微升清理液（Reagent C），清洗样品表面

14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）

15．重复实验步骤 13 至 14 二次

16．即刻放上盖玻片或封片

17．在荧光显微镜下观察：激发波长：340nm；散发波长：430nm――胆固醇阳性呈现蓝色荧光

注意事项

1． 本产品为 20 次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 建议用户避免使用常规石蜡包埋组织切片，即石蜡包埋前避免二甲苯等透明处理

2

3

4． 操作时，避免污染母液

5． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

6． 荧光容易受到光漂白（photobleach），建议使用抗淬灭剂Ⅰ－12058.2

7． 样品染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察

8． 本公司提供系列组织细胞胆固醇染色试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰