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冰冻切片组织衰老特异性早期脂褐素苏丹黑原位染色试剂盒产品说明书

主要用途

冰冻切片组织衰老特异性早期脂褐素苏丹黑原位染色试剂是一种旨在使用标准化脂溶性偶氮染料苏丹黑B技术，分析组织样品中早期脂褐素沉积现象，从而在光学显微镜下观察到黑色表达的组织细胞作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老组织细胞的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于人体或动物组织冰冻切片的的早期脂褐素检测。广泛应用于细胞生物学研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。  

技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，其中脂褐素颗粒聚集增多成为细胞衰老的特征性生物学标记。脂褐素（lipofusin），又称为“磨损（wear and tear）"色素，是一种细胞内与年龄相关的棕黄色荧光胞浆颗粒色素，主要在有丝分裂后细胞的继发性溶酶体内。脂褐素常见于老年人的永恒性非分裂性组织细胞里，例如心脏、肝脏和神经等，尤其在衰老诱导的细胞退变中聚集增多，特别是的组织。脂褐素来自于氧化的蛋白和脂质，成为细胞衰老中后期的独立指征。苏丹黑B（SUDAN BLACK B），又称为二氢二基偶氮萘偶氮嵌间二氮杂苯（2,3-dihydro-2,2-dimethyl-6-（4-phynylazo）-1-naphthyl）azo）1H-perimidine），是一种脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式为C26H24N4O，分子量为408.51。脂褐素分为早期和晚期，早期脂褐素的脂质特性与脂溶性苏丹黑B染料发生反应，显示黑色。同时使红细胞呈现黑色。

产品内容

清理液（Reagent A）              毫升

固着液（Reagent B）          毫升

染色液（Reagent C）          毫升

澄清液（Reagent D）          毫升

产品说明书               1份

保存方式

保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent C）和澄清液（Reagent D）避免光照，瓶盖密闭；有效保证6月

用户自备

小型染色缸：用于切片组织细胞染色操作

光学显微镜：用于观察染色后的组织细胞

实验步骤

1． 取出待测的10微米厚冰冻组织切片（注意：使用快速冷冻snap－frozen制片，避免包埋处理）  

2． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个样品表面

3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升固着液（Reagent B）在切片上，铺满整个样品表面

5． 在室温下孵育15分钟

6． 小心移去切片上的固着液（Reagent B）

7． 小心加上xx微升清理液（Reagent A），清洗样品表面

8． 在室温下孵育5分钟

9． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

10． 小心将切片置入xx毫升染色液（Reagent C）的小型染色缸里（注意：确保切片浸泡在染色液（Reagent C））

11． 室温下孵育16小时，避免光照，密闭瓶盖

12． 取出切片，小心移去切片上的染色液（Reagent C）

13． 室温下，小心将切片置入新的xx毫升澄清液（Reagent D）中5次（2秒/次）（注意：直至切片颜色呈现灰色）

14． 轻轻移去切片上的澄清液（Reagent D），或空气中晾干 

15． 小心加上xx微升清理液（Reagent A）

16． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

17． 放上盖玻片或封片（水相或中性树脂）

18． 即刻在一般光学显微镜下观察：脂褐素阳性组织细胞呈现黑色，红细胞呈现黑色，背景呈现不同程度灰色

注意事项

1． 本产品为50次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 本产品不适合于含有红细胞的样本

4． 使用时，避免污染母液

5． 染色液（Reagent C）避免光照

6． 染色时，染色缸须密闭，至关重要

7． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

8． 染色后澄清不宜过度，否则容易褪色

9． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

10． 本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定着色清晰 

使用承诺

公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺"的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。