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主要用途

细胞膜流动性（fluidity）PDA 荧光检测试剂是一种旨在通过苯并芘癸酸荧光染料，选择性地与细胞膜整合，

并与之产生空间交互作用，形成激基缔合物，其荧光散发波长的转移，即荧光比值的增强或减弱，来分析

膜流动性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体或动物贴

壁或悬浮细胞膜流动性的动力学检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简易，性能稳定。

技术背景

细胞膜和细胞质微管以及微丝的动力学特征和微泡和囊泡内脂质的流动动力学，即流变学（rheological）细

胞功能，受到细胞膜流动性（fluidity）或粘性（viscosity）调节，包括细胞膜酶系的活化，微管和微丝的特

定装配或流动，化学引诱物受体亲和力的强化，膜结构和功能的作用等。一旦调节失衡，会导致病理演变

或膜性变异。苯并芘癸酸（pyrenedecanoic acid；PDA）为多环芳香烃（polycyclic aromatic hydrocarbon）化

合物，一种亲脂性苯并芘荧光探针染料，用于膜生物物理学研究：第一，具有亲脂性； 第二，与细胞膜脂

质具有类似性（analog），可以与细胞膜整合；第三，进入膜结构空间后，与之产生交互作用，形成激基缔

合物（eximer），其荧光散发波长由372nm转移到470nm，通过缔合物和单体的荧光比值（ratio），分析膜流

动性强弱，包括动力学，影响因子等。

产品内容

染色液（Reagent A）

微升

稀释液（Reagent B）

毫升

清理液（Reagent C）

毫升

强化液（Reagent D）

微升

产品说明书

1 份

保存方式

保存清理液（Reagent C）在 4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent A）避免光照；有

效保证 6 月

用户自备

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离操作

细胞培养液（12052）：用于细胞脱落操作

1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器

微型台式离心机：用于样品操作

培养箱：用于染色孵育

（共聚焦）荧光显微镜：用于荧光定性分析

比色皿或黑色 96 孔板：用于荧光定量分析的容器荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析

细胞流式仪：用于荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent B）

和强化液（Reagent D）放进 25℃恒温水槽里预热。然后分别移出 xx 微升染色液（Reagent A）和 xx 微升

强化液（Reagent D）到新的 1.5 毫升离心管，加入 980 微升稀释液（Reagent B），混匀后，在冰槽里静置

（共 5 次操作量），并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

一、直接法

1． 准备 1 个 96 孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达 70％（约 1 X 10 5细胞数）

2． 小心抽去细胞培养液

3． 轻轻沿着孔壁加入 xx 微升 清理液（Reagent C）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4． 小心抽去清理液（Reagent C）

5． 加入 xx 微升含有染色液（Reagent A）、稀释液（Reagent B）和强化液（Reagent D）的染色工作液，

覆盖培养孔表面

6． 放进 25℃细胞培养箱里，孵育 20 分钟（注意避光）

7． 小心抽去染色工作液

8． 小心加入 xx 微升清理液（Reagent C）

9． 小心抽去清理液（Reagent C）

10．重复实验步骤 8 至 9 一次

11．小心加入 xx 微升清理液（Reagent C）

12．选择下列检测：

一、 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察

1） 单体荧光（二向色性滤波器激发波长 350nm，散发波长 370nm，干涉滤波器 405nm 波长 ）――

可见浅蓝色荧光；如果强度明显，表明膜流动性减弱

2） 激基缔合物（eximer）荧光（二向色性滤波器激发波长 350nm，散发波长 470nm）――可见

深蓝色荧光；如果强度显著减弱，表明膜流动性减弱

二、即刻在荧光酶标仪检测（激发波长 350nm，散发波长 370nm 和 470nm）：获得相对荧光单位

（relative fluorescence unit；RFU）以及 RFU470/RFU370 的比值：比值高，膜流动性强

二、间接法

1． 准备 1 个 12 孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达 70％（约 2 X 10 6细胞数）

2． 小心抽去细胞培养液

3． 加入 xx 毫升 清理液（Reagent C）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面

4． 小心抽去 xx 毫升 清理液（Reagent C）

5． 加入 500 微升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养孔表面

6． 置入 37℃培养箱 1 分种

7． 轻轻抖动培养板，使细胞脱落，然后加入 1 毫升用户自备的细胞培养液

8． 移入 1.5 毫升离心管（注意：悬浮细胞从这一步开始）

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9． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 1000g

10．小心抽去上清液

11．加入 xx 微升含有染色液（Reagent A）、稀释液（Reagent B）和强化液（Reagent D）的染色工作液

12．用 200 微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群

13．放进 25℃细胞培养箱里，孵育 20 分钟（注意避光）

14．放进微型台式微型离心机离心 5 分钟，速度为 1000g

15．小心抽去上清液

16．加入 xx 微升清理液（Reagent C），混匀细胞颗粒群

17．放进微型台式微型离心机离心 5 分钟，速度为 1000g

18．小心抽去上清液

19．重复实验步骤 16 至 18 一次

20．加入 xx 微升清理液（Reagent C），混匀细胞颗粒群

21．进行下列检测

选择一、（共聚焦）荧光显微镜观察

1． 混匀后，移出 50 微升在载玻片上

2． 即刻进行载玻片压片，在荧光显微镜下进行观察：

1） 单体荧光（二向色性滤波器激发波长350nm，散发波长370nm，干涉滤波器405nm 波长 ）――

可见浅蓝色荧光；如果强度明显，表明膜流动性减弱

2）激基缔合物（eximer）荧光（二向色性滤波器激发波长 350nm，散发波长 470nm）――可见

深蓝色荧光；如果强度显著减弱，表明膜流动性减弱

选择二、细胞流式仪分析

1. 混匀后，即刻进行细胞流式仪分析：观察 5000 个细胞以上

激发波长

360nm

荧光颜色

蓝色

散发波长

单体波长 400nm 和缔合物波长 450nm

（70nm 波宽）

荧光变化

建立象限图/散点图

选择三、荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定

1． 混匀后，移出 100 微升到黑色 96 孔板里或 100 微升比色皿里

2． 即刻进行荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定（激发波长 350nm，散发波长 370nm 和 470nm）：获得相

对荧光单位（relative fluorescence unit；RFU）以及 RFU470/RFU370 的比值：比值高，膜流动性强

注意事项

1． 本产品为 20 次（0.2 毫升工作液）操作2． 操作时，须戴手套

3． 待测细胞建议不要过于饥饿或过度生长

4． 操作时，避免污染母液，尤其是稀释液（Reagent B）

5． 建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析

6． 孵育时，避免光照

7． 本公司提供系列膜流动性检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰