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HL10067.2 v.A

 冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子原位染色试剂盒产品说明书

主要用途

冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子原位染色试剂是一种旨在通过硝基蓝四氮唑染料， 受到超氧 阴离子O2- 的还原， 产生不溶性蓝黑色色素沉淀，来定性检测冰冻切片组织细胞内超氧阴离子活性氧族的生 成和增加的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞 凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌， 即到即用，操作简捷， 性能稳定，显色 清晰。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基   （hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷   氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-） 次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等   细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多， 将导致细胞衰老或凋亡。染料四氮唑兰  （tetrazolium）化合物，包括硝基蓝四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝  （3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧阴离子O2- 的直接还原， 便产生不溶性甲暨色素。据此证明组织细胞内超氧阴离子活性氧族的存在。

产品内容

 清理液（Reagent A）

 染色液（Reagent B）

产品说明书

保存方式

毫升

毫升

1 份

保存  染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保 证 6 月

用户自备

细胞培养箱：用于组织细胞染色孵育

光学显微镜：用于观察染色后的组织细胞

实验步骤

1 ． 准备 5 片待测的厚为 10 微米的未经固着处理的冰冻切片

2 ． 置于室温下，小心加上 xx 微升预冷的  清理液（Reagent A），铺满整个切片表面 3 ． 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）

4 ． 小心加上 xx 微升室温预热的  染色液（Reagent B），铺满整个切片表面 5 ． 在 37℃湿润培养箱里，孵育 60 分钟（注意： 避免液体蒸发）

6 ． 小心移去切片上的  染色液（Reagent B），避免光照

7 ． 小心加上 xx 微升  清理液（Reagent A），铺满整个切片表面

8 ． 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）

9 ． 重复实验步骤 7 和 8 二次

10 ．放上盖玻片或封片

11 ．即刻置于光学显微镜下观察：组织细胞呈现蓝黑色，显示超氧阴离子浓度增强

注意事项

1 ． 本产品为 50 次操作

2 ． 建议使用新鲜组织（手术切除后 1 小时内）制成的冰冻切片

3 ． 操作时，须戴手套

4 ． 孵育时，须避免光照

5 ． 组织染色前后的清洗过程中，小心操作，以免将组织冲洗掉

6 ． 如果超氧阴离子活性氧浓度过低，可以延长孵育时间至 4 小时

7 ． 建议切片染色完成后，即刻进行组织细胞观察分析

8 ． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品

质量标准

1 ． 本产品经鉴定性能稳定