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小牛血清使用注意事项及细胞毒性评估方法
点击次数：629 更新时间：2024-10-23
 

小牛血清在生物实验和细胞培养中至关重要，但其使用需严格遵守以下注意事项：

  1. 供血来源：供血的新生小牛必须是健康牛的产仔，并在产后24小时内抽血，期间不得吸取母乳。

  2. 无菌操作：以无菌操作自颈动脉放血，并在无菌条件下分离血清及滤菌，全过程需在36小时内完成。

  3. 保存条件：滤菌后的血清需妥善保存，确保其质量和稳定性。

  4. 质量检测：使用前需进行细菌、支原体培养及内毒素测定，确认无污染后方可使用。

  5. 总蛋白含量测定：每批小牛血清应测定总蛋白含量，并分别配成不同浓度进行细胞培养，观察其细胞毒性。

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细胞毒性评估方法

观察小牛血清的细胞毒性可采用多种方法，包括：

  1. MTS比色法：基于活细胞还原MTS产生甲瓒产物的原理，通过测定甲瓒产物的吸光度来评估细胞存活率和增殖情况。

  2. 细胞生长曲线测定：通过绘制细胞在不同浓度小牛血清中的生长曲线，观察小牛血清对细胞增殖的影响。

  3. 细胞形态观察：利用显微镜观察细胞形态，直观了解细胞在含有小牛血清的培养基中的生长状态。

  4. 克隆形成率测定：通过测定克隆形成率来评估小牛血清对细胞增殖和存活的影响。

  5. 乳酸脱氢酶（LDH）释放试验：通过测定培养液中LDH的含量来反映细胞膜的完整性和细胞的损伤程度。

综上所述，根据实验需求和条件，可以选择合适的方法进行小牛血清的细胞毒性评估。