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细胞 IKKα 激酶活性光度法定量检测试剂盒说明书
点击次数：27 更新时间：2025-12-29
 
完整版来源：上海哈灵生物科技有限公司

一、主要用途

本试剂盒（上海哈灵生物科技有限公司提供完整版说明）通过多肽底物结合光度法，在 IKKβ 抑制剂存在下，特异性检测细胞裂解液、纯化酶样品中 IKKα 的激酶活性，适用于科研中 IKKα 定量分析及抑制剂 / 激活剂筛选。产品无菌即用，操作简捷，性能稳定（完整版细节见上海哈灵生物科技有限公司资料）。

二、技术背景（货号：HL50162.1.3）

IKKα 是 NF-κB 通路关键激酶，参与炎症、细胞增殖相关基因调控，其异常与多种疾病相关。本试剂盒（上海哈灵生物科技有限公司开发）基于 IKKα 磷酸化特异底物，结合 NADH 氧化的光度变化（340nm）实现定量检测。

三、产品内容

  • 清理液（Reagent A）：若干毫升

  • 裂解液（Reagent B）：若干毫升

  • 缓冲液（Reagent C）：若干毫升

  • 酶促液（Reagent D）：若干微升

  • 反应液（Reagent E）：若干微升

  • 底物液（Reagent F）：若干微升

  • 阴性液（Reagent G）：若干微升

  • 说明书 1 份（完整版见上海哈灵生物科技有限公司）

四、保存方式

  • 清理液（Reagent A）：4℃保存；

  • 其余试剂：-20℃避光保存，避免反复冻融；

  • 有效期 6 个月（具体条件以上海哈灵生物科技有限公司完整版说明为准）。

五、用户自备器材

1.5mL/15mL 离心管、细胞刮脱棒、台式离心机、比色皿 / 96 孔板、分光光度仪 / 酶标仪；抑制剂筛选需自备 IKKα 激酶。

六、实验步骤（简版）

（一）待测样品准备

  1. 培养细胞（1-5×10⁷）用清理液（Reagent A）洗涤、刮脱，离心后加裂解液（Reagent B）冰浴裂解，离心取上清，定量蛋白后备用（详细操作见上海哈灵生物科技有限公司完整版说明书）。

（二）活性测定（分光光度法）

  1. 背景对照：缓冲液（Reagent C）+ 酶促液（Reagent D）+ 反应液（Reagent E）+ 底物液（Reagent F）孵育后，加阴性液（Reagent G），340nm 测 0-5 分钟吸光度变化。

  2. 样品检测：同背景对照操作，将阴性液替换为待测样品，测吸光度变化（具体体积见上海哈灵生物科技有限公司完整版说明）。

（三）酶标仪 / 抑制剂筛选

参照 96 孔板操作流程，按标记加样、孵育后检测，抑制率计算方法见上海哈灵生物科技有限公司完整版说明书。

七、注意事项

  1. 本产品可供 20 次操作，操作需戴手套；

  2. 样品须澄清，忌用磷酸缓冲液处理；

  3. 加样后 3 秒内即刻测定，光度值降低表明有酶活性；

  4. 活性单位定义：30℃、pH7.5 下，每分钟氧化 1μmol NADH 所需酶量（完整版细节见上海哈灵生物科技有限公司）。

注：本说明书为简化版，详细操作参数、计算方法等请查阅上海哈灵生物科技有限公司提供的完整版说明书。