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主要用途

体外微管蛋白聚合作用（polymerization）荧光检测试剂是一种旨在运用微管聚合体荧光结合探针，通过荧光酶标仪，分析样品中微管蛋白聚合作用的动力学变化的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种细胞或组织粗提或纯化微管蛋白的聚合动力学分析，以及相关蛋白、抑制剂、诱导剂筛选。可以用于细胞周期的形态学研究，以及微管细胞骨架的蛋白分析。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景

微管（microtubules）是细胞骨架的成分之一，构成细胞浆中的基本结构网络，在有丝分裂、胞质分裂、囊泡转运方面具有重要作用。微管是微管蛋白（tubulin）的多聚体。微管蛋白分成5种亚型：α、β、γ、δ、ε。其中α和β微管蛋白（55Kd）形成异源二聚体，进而多重聚合成微管原纤维（proto-filaments）。微管由13个原纤维构成，直径为25纳米。每微米长微管由1650个异源二聚体组成。基于微管聚合体荧光结合探针DAPI，一旦特异整合，荧光强度显著增加，通过荧光酶标仪（360nm激发波长，420nm散发波长）分析微管蛋白聚合作用的动力学变化：聚集、快速形成和均衡稳态的阶段演变，由此可以进行评价纯化微管蛋白或裂解萃取液的聚合能力、筛选各种抑制剂和诱导剂等。

产品内容

反应液（Reagent A）             XX毫升

标准液（Reagent B）             XX微升

产品说明书             1份

保存方式

保存在－70℃冰箱里，严禁反复冻融，避免光照；有效保证3月

用户自备

微管蛋白：用于抑制剂和诱导剂筛选

黑色96孔板：用于荧光分析的容器

荧光酶标仪：用于微管蛋白聚合分析

实验步骤

实验开始前，将－70℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：

1． 准备好待测的粗提或纯化微管蛋白样品（100微克/10微升），置于冰槽里待测

2． 设定好荧光酶标仪：温度37℃，（360nm激发波长，420nm散发波长），间隔60秒，测读31次（共30分钟） 

3． 准备好黑色96孔板，37℃预热，并标记好待测样品和标准样品

4． （选择步骤）加入5微升用户自备的待测抑制剂或诱导剂样品

5． 移取XX微升反应液（Reagent A）到37℃预热的黑色96孔板的相应孔里

6． 放进37℃培养箱里孵育1分钟

7． 加入10微升待测微管蛋白（100微克）样品到待测样品孔里

8． 加入XX微升标准液（Reagent B）到标准样品孔里

9． 摇动黑色96孔板混匀

10． 即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位吸（RFU）

11． 构建样品聚合反应曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位吸（RFU）；横座标（X轴）为反应时间（分钟）

12． 抑制或诱导活性计算：

1) XX

2) IC50：5XX

3) 

注意事项

1． 本产品为20次操作量

2． 试剂严禁反复冻融

3． 操作时，须戴手套

4． 操作时，避免气泡产生

5． 样品避免含有NaCl、钙离子等成分

6． 标准液（Reagent B）源自于猪脑微管蛋白，100微克/10微升

7． 标准样品聚合作用后的荧光读数3至4倍于0分钟读数

8． 建议使用紫杉醇（paclitaxel；终浓度3微摩尔）作为诱导剂对照

9． 建议使用噻氨酯哒唑（nocodazole；终浓度3微摩尔）作为抑制剂对照

10． 如果进行抑制剂筛选，建议另购纯化微管蛋白（tubulin）—12319

11． 本公司提供系列细胞骨架检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感