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体外非细胞系统CYP3A4活性荧光定量检测试剂盒说明书
点击次数：26 更新时间：2026-05-25
 
注：本文件为语燕生物精简版说明书，完整详细操作手册、参数细则及技术答疑可咨询语燕生物工作人员获取。

一、主要用途（货号）

本试剂盒为语燕生物优化研发的荧光定量检测试剂，基于BFCD反应体系，依托NADPH生成系统，检测苄氧基三氟甲基转化为羟基三氟甲基（HFC）的荧光峰值变化，定量检测CYP3A4酶活性。适用于血清、血浆、纯化微粒体、CYP3A4纯酶等样本的活性检测。产品无菌即用、操作便捷、性能稳定，可满足CYP3A4酶活性常规检测需求。

二、技术背景

细胞色素P450酶是人体关键代谢酶系，包含五十余种亚酶，其中CYP3A4占肝脏P450总量30%、肠道P450总量70%，介导市场超60%药物的氧化、羟化代谢，是药物代谢、毒理学研究的核心靶点，人源CYP3A4对应小鼠3A11亚酶。
语燕生物采用成熟BFCD特异性检测体系，以苄氧基三氟甲基为特异性底物，在NADPH体系辅助下，CYP3A4催化底物生成具有荧光特性的HFC，通过检测激发波长410nm、发射波长538nm的荧光信号，定量检测酶活性，适配CYP3A4检测需求。

三、试剂盒组分

本套试剂由语燕生物标准化配比制备，组分齐全、配比稳定，具体如下：

  • 缓冲液（Reagent A）：若干毫升

  • 反应液（Reagent B）：若干微升

  • 底物液（Reagent C）：若干微升

  • 终止液（Reagent D）：若干毫升

  • 标准液（Reagent E）：若干微升

  • 语燕生物产品说明书：1份

四、保存条件与有效期

全程-20℃避光冷藏保存，其中反应液、底物液、标准液需严格避光，避免反复冻融。语燕生物规范把控试剂品质，产品有效保质期为6个月。

五、用户自备器材与设备

为匹配语燕生物本试剂盒检测体系，需自备以下常规实验器材：

  • 1.5mL离心管（样本、标准品配制专用）

  • 恒温培养箱（37℃恒温孵育）

  • 200μL 1cm光径比色皿/黑色96孔板（荧光检测载体）

  • 荧光分光光度仪/荧光酶标仪（信号检测设备）

六、实验操作步骤（精简版）

实验前将试剂盒所有试剂置于冰槽融化，全程避光操作，参照语燕生物标准化流程开展实验。

（一）测定准备

1、待测样本（微粒体、纯酶、体液样本等）冰上预冷备用，样本需澄清无杂质；
2、仪器参数预设：温度37℃，激发波长410±20nm、发射波长530±25nm，开机调零；
3、取5支1.5mL离心管标记1-5号，每管加入定量缓冲液Reagent A；
4、梯度稀释标准液：1号管加标准液，依次梯度稀释至4号管，5号管为空白对照；
5、所有标准管冰上避光保存备用。

（二）标准曲线测定

1、离心管中依次加入定量缓冲液、反应液、4μL底物液、20μL梯度标准液；
2、37℃避光孵育30min，可根据酶活性调整为45min；
3、加入定量终止液混匀，转移至检测载体；
4、上机检测获取RFU值，扣除空白对照（5号管）荧光值，得到实际荧光强度；
5、以HFC浓度为X轴、实际RFU值为Y轴，绘制标准曲线（语燕生物可提供标准曲线拟合参考方法）。

（三）样品活性测定

1、离心管中依次加入定量缓冲液、反应液、底物液，加入20μL澄清待测样本；
2、37℃避光孵育30min，酶活性偏低可延长至45min；
3、加终止液混匀后上机检测，扣除空白荧光值；
4、结合标准曲线，换算样本对应的HFC浓度，用于酶活性计算。

（四）活性计算

依据语燕生物定义的酶活性标准计算：37℃、pH7.5条件下，每分钟转化1nmol苄氧基三氟甲基为HFC的酶量，即为1个CYP3A4活性单位。完整计算公式可咨询语燕生物获取。

七、关键注意事项

1、试剂盒总通量为25次检测（含标准曲线测定），适配常规实验需求；
2、全程佩戴实验手套，标准曲线单次实验仅需测定1次，无需重复制备；
3、待测样本需保持澄清状态，样本浑浊会影响检测结果准确性；语燕生物可提供配套细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒（30002.1）用于样本前处理。
4、若检测酶活性偏低，可在37℃条件下将孵育时长调整至45分钟。
5、荧光检测完成后，需清洗比色皿，避免残留物质干扰后续检测。
6、不同待测样本需对应标准蛋白浓度：血清样本100微克/20微升、微粒体样本20微克/20微升、纯酶蛋白样本10微克/20微升；语燕生物配套提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒（30030.1），可用于样本蛋白浓度标定。
7、待测样本浓度偏高或偏低时，可适度调整样本浓度后重新检测。
8、可采用CYP3A4抑制剂（CISAPRIDE，IC50＝60纳摩尔）设置抑制剂对照或阴性对照，提升实验严谨性。
9、CYP3A4酶活性单位定义：37℃、pH 7.5环境下，每分钟转化1纳摩尔苄氧基三氟甲基为羟基三氟甲基的酶量，即为一个酶活性单位。
10、语燕生物可提供各类毒理学检测配套试剂产品，适配相关实验拓展需求。