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产品内容

缓冲液（Reagent A）           毫升

反应液（Reagent B）           微升

底物液（Reagent C）            微升

终止液（Reagent D）            毫升

标准液（Reagent E）            微升

产品说明书               1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，反应液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和标准液（Reagent E）避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于标准样品操作的容器

培养箱：用于孵育反应

200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作

一、 测定准备

1． 准备好待测样品（例如纯化P450亚酶3A4或微粒体样品等），置于冰槽里

2． 设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长410±20nm，散发波长530±25nm，并置零 

3． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

4． 分别加入xx微升缓冲液（Reagent A）到每个离心管

5． 移取xx微升标准液（Reagent E）到1号管，混匀

6． 小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent E）到2号管，混匀

7． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent E）到3号管，混匀

8． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent E）到4号管，混匀

9． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

二、 标准曲线测定

1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管

2． 加入xx微升反应液（Reagent B）

3． 加入4微升底物液（Reagent C）

4． 加入20微升上述配制的标准液

5． 在37℃温度下孵育30分钟，避免光照

6． 加入xx微升终止液（Reagent D），混匀

7． 移入到比色皿或黑色96孔板

8． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

9． 重复实验步骤1至9，测读完所有标准样品

10． 实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）

三、 样品活性测定

1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管

2． 加入xx微升反应液（Reagent B）

3． 加入xx微升底物液（Reagent C）

4． 加入20微升待测样品（20微克微粒体蛋白）（注意：样品须清澈）

5． 在37℃温度下孵育30分钟，避免光照

6． 加入xx微升终止液（Reagent D），混匀

7． 移入到比色皿或黑色96孔板

8． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

9． 实际荧光单位：样品总活性相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）

四、 计算样品活性：

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感

这个是简版说明书 仅供参考