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简介  

   植物草胺膦乙酰转移酶（phosphinothricin acetyltransferase；PAT）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过通用底物草铵膦，通过草铵膦乙酰转移酶的作用，将乙酰辅酶A上的乙酰基团，转移到草铵膦分子上的过程中，释放出巯基辅酶A，进而使用巯基荧光探针，产生高度荧光产物，即采用荧光法来测定植物裂解萃取样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、谷粒（grain）等裂解萃取液样品、部分或纯化酶样品中草铵膦乙酰转移酶的特异活性检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

样品准备流程

1． 标记好样本背景和样本活性管

2． 分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿或黑色96孔板

3． 加入xx微升缓冲液（Reagent C）到样本背景管

4． 加入xx微升反应液（Reagent D）到样本活性管

5． 分别加入xx微升底物液（Reagent E）到所有管

6． 分别加入10微升待测样品（注意：50微克蛋白；样品须清澈）到所有管

7． 上下倾倒数次，混匀

8． 在25℃温度下孵育10分钟

9． 分别加入xx微升终止液（Reagent F）到所有管

10． 分别加入xx微升染色工作液到所有管，混匀

11． 在25℃温度下孵育15分钟，避免光照

12． 即刻放进荧光分光光度仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

13． 样品实际荧光单位：样品活性相对荧光读数－样品背景相对荧光读数 

注意事项

1． 本产品为20次操作，包括平行背景对照

2． 操作时，须戴手套

3． 样品须澄清，至关重要

4． 样品处理时，避免使用巯基乙醇、DTT等

5． 孵育反应完成后即刻进行荧光测定

6． 滤波器可以使用激发波长360至390nm和散发波长450至470nm之间的任一波长

7． 测定值由低到高变化

8． 测定值荧光读数越高，表明酶活性越高

9． 荧光测定后，比色皿须清洗

10． 待测样本蛋白浓度为50微克/10微升（本公司提供  Bradford蛋白质浓度定量试剂盒30030.1）

11． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

12． 草铵膦乙酰转移酶单位活性定义为：在25℃，pH 7.5条件下，每分钟内能够释放1纳摩尔巯基辅酶A所需的酶量作为一个活性单位

13． 本公司提供系列乙酰转移酶检测试剂产品