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PCR测试盒技术 荧光探针和荧光染料及其原理
点击次数：1827 更新时间：2013-08-04
 
 PCR测试盒 荧光探针和荧光染料及其原理2
 
1、 PCR测试盒原理技术 荧光探针和荧光染料及其原理分子信标
  分子信标是一种在靶 DNA 不存在时构成茎环布局的双符号寡核苷酸探针。在此发夹结构中，位于分子一端的荧光基团与分子另一端的淬灭基团紧紧接近。在此结构中，荧光基团被激起后不是发生光子，而是将能量传递给淬灭剂，这一进程称为荧光谐振能量传递（ FRET ）。因为 " 黑色 " 淬灭剂的存在，由荧光基团发生的能量以红外而不是可见光方式开释出来。若是第二个荧光基团是淬灭剂，其开释能量的波长与荧光基团的性质有关。分子信标的茎环结构中，环通常为 15-30 个核苷酸长，并与目标序列互补；茎通常 5-7 个核苷酸长，并彼此配对构成茎的结构。荧光基团衔接在茎臂的一端，而淬灭剂则衔接于另一端。分子信标有必要十分非常的设计，以致于在复性温度下，模板不存在时构成茎环结构，模板存在时则与模板匹配。与模板配对后，分子信标的构象改动使得荧光基团与淬灭隔开。当荧光基团被激起时，它发出自身波长的光子。
 
2、PCR测试盒原理技术荧光探针和荧光染料及其原理TaqMan 探针
  TaqMan 探针是多人具有的技术。 TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它的荧光与目的序列的扩增有关。它设计为与目标序列上游引物和下流引物之间的序列配对。荧光基团连接在探针的 5’ 尾端，而淬灭剂则在 3’ 结尾端。当完好的探针与目标配对时，荧光基团发射的荧光因与 3’ 端的淬灭剂靠近而被淬灭。但在进行延伸反应时，聚合酶的 5’ 外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离。 TaqMan 探针适合于各种耐热的聚合酶，如 DyNAzymeTM II DNA 聚合酶。随着扩增循环数的增多，释放出来的荧光基团不断堆集。因而荧光强度与扩增产品的数量呈正比关系。