技术文章Article 首 页 > 技术文章 > 菜鸟做ELISA试剂盒实验的一些心得体会
菜鸟做ELISA试剂盒实验的一些心得体会
点击次数：3886 更新时间：2013-08-06
 
菜鸟ELISA试剂盒实验之标本搜集
 
        这个很要害呀！标本搜集及保管的好坏，直接决议了试验能否成功。在搜集标本之前有必要考虑到试验对标本搜集及保管的需求，这些需求对标本中待测物质稳定性影响很大。以ELISA为例。ELISA检测的通常是液态标本，应在搜集到新鲜标本后当即离心留取上清液1ml左右移入高温灭菌过的1.5ml EP管中。这种标本在4度保管48小时，-20度保管1个月，-80度保管6个月对检测影响不大。
 
        样本通常都是怕重复冻融的，这样会使蛋白降解，如需做预试验或需重复取用标本时，应在搜集时即分装几个EP管（管外注意用标号笔标记好，否则就会牛头不对马嘴了！）。不注意这些需求，即便试验做的再美丽也是瞎的，不大会出成果。 
 
菜鸟ELISA试剂盒实验之实验前的准备以及开始实验
 
       .试验前的预备工作那是适当的重要。要用到的100ul中枪头、1000ul大枪头、1.5ml EP管事前灭菌好是有必要的；屡次运用的酶标板框洗净烘干。
 
        100ul加样枪及枪头，1000ul加样枪及枪头，100ml量筒（洗净并双蒸水冲刷），500ml量杯（洗净并双蒸水冲刷，试验室没有更小的了），双蒸水100ml（稀释洗涤液用），吹气球，吸水纸（定性滤纸），试管架，避光湿盒，酶标板框，定时器，胶带，剪刀，弃物盒及废液缸。
 
        预备试验时进入试验室即翻开37度恒温箱让它开端升温，否则比及需求用时再翻开，你急它不急，它升温需求时刻，能够现已过了要温育的时刻它才到达37度；样品和试剂盒在室温下平衡30分钟以上。
 
        ELISA试剂盒固化的抗体在底部，加样时枪头千万不要碰究竟部；用不完整个试剂盒能够分隔用，但分时必定不要摸底部，缘由同前。试验前佳自个写一个操作进程，把操作中注意事项写明白。不要只看着试剂盒阐明书做，由于阐明书是把操作程序和注意事项分隔写了，看不过来，别的阐明书上许多东西究竟写的不具体，网上的经历参阅也要写在操作进程里，越具体越好； 
 
        通常一批标本只会运用有些试剂和微孔板，事前计算好需求的试剂量，分别用1ml注射器抽取比需求量多做3-5个标本的试剂转移到标记好的1.5mlEP管中，注意1ml注射器不要混用，做到一剂一个注射器。别的显色液B要避光，转移时关灯，放的EP管用黑纸包住； 
 
        加样枪的运用：运用前调整加样枪加样量（如我的ELISA试剂盒通常是50ul），吸试剂时按到有阻力感就行了，若是按究竟，加样量必定超越枪上标明的量了；打出试剂时按到有阻力感后持续下按究竟以便排尽枪头中的试剂；加显色剂B时要关灯而且敏捷，加好后用避光袋包住或放在避光湿盒中再孵育；加样时尽量防止发生气泡，如有气泡成生，可用吹气球吹破之； 
 
        每次孵育时用胶带封住酶标板口，防止水份蒸腾。微孔板通常是一排8个，在其一端排头的边际用记号笔标记下次序（如1，2，3...），防止手艺洗板进程中板朝下拍时不小心致微孔板掉出酶标板框而无法承认次序。
 
         加标准品和样品时每次都要替换一个枪头，防止重复运用枪头而穿插污染； 37度温育后千万不要忘掉倒掉微孔板中的液体（包括未结合上的酶联亲和物，其残留必定形成假阳性），而且要重复用稀释好的洗涤剂洗板；洗板能够多洗几回，没坏处；
 
        洗板可用50ml或20ml注射器针管+1ml注射器针头抽洗涤液直接往微孔中冲刷，注意针头安牢，否则压力大时把针头冲到微孔里划到孔底，很多洗涤剂冲入就不好玩了。 应做预试验和规范曲线，若是大都样本测值在高OD值处动摇，要稀释后再重做，然后按稀释倍数算出来终成果，因为试剂盒是有测验规模的。