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人S-100ELISA试剂盒 说明书

    检测范围:78 pg/mL -5000 pg/mL;实验原理:本产品运用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中S-100水平的技术。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入S-100抗原、生物素化的抗人S-100抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转变成蓝色，并在酸的作用下终转变成黄色。颜色的深浅和样品中的S-100呈正比。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中S-100含量。

人S-100ELISA试剂盒的组成以及试剂配制方法：

1.酶联板:一块（96孔）

2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释到1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复摇晃以助溶解，其浓度为5000 pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成5000 pg/mL，2500 pg/mL，1250 pg/mL，625 pg/mL，312.5 pg/mL，156 pg/mL，78 pg/mL其原液直接当作高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/mL，要临用前15分钟内配制。如配制2500 pg/mL标准品：取0.5ml 5000 pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液:1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A:1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B:1×10ml/瓶。

6.检测溶液A:1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B:1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

8.底物溶液:1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液:1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液:1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

标本的采集及保存：

1.细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。

2.血清:标本请于室温放置2小时或4℃过液后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

3.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤：

各试剂在使用前平衡到室内温度。

1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品100ul，注意不要有气泡，轻轻混和均匀，酶标板加上盖，在37℃下反应120分钟。

2.弃倒掉液体，甩干，不用洗涤。

3.每孔加检测溶液A工作液 100ul，37℃,60分钟,洗板3次，350ul/每孔，甩干。

4.每孔加检测溶液B工作液（100ul），37℃,60分钟,洗板5次，甩干。

5.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色30分钟（此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显）。

6.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时兰色立转黄色）。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。

注：

1.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不填加任何试剂，只是后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

2.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。

洗板方法:

1.手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。

2.自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

计算:以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

特异性:本试剂盒可同时检测重组或天然的人S-100，且与其它相关蛋白没有交叉反应。

注意事项：

1.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

2.一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

3.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。

4.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

5.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

6.底物须避光保存。

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说明:

1.刚开启的酶联板孔中可能会含有少量水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

2.浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4.保存条件:-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

5.人S-100ELISA试剂盒有效时间:6个月