elisa试剂盒的制备流程 |
点击次数:1936 更新时间:2013-08-16 |
elisa试剂盒的制备流程一:
酶标抗体 (酶标抗体制备技术基本要求是将酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合既不改变抗体的免疫反应活性,也不影响酶的生物化学活性。用于标记抗体的酶较多,常用的有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化物酶和β-半乳糖苷酶等。) 或抗抗体(抗免疫球蛋白)结合物可采用戊二醛法或过碘酸盐氧化法制备。郭春祥建立的辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行,标记效果好,特别适用于实验室的小批量制备。现将操作方法介绍如下:
(一) 结合物的标记将5mg HRP溶于05ml蒸馏水中,加入新配制的006mol/L NaIO4水溶液05ml,混匀,置冰箱30min,取出加入016mol/L乙醇水溶液05ml,室温放置30min后,加入含5mg纯化抗体的水溶液(或PBS)1ml,混匀并装透析袋,以005mol/L、pH值95碳酸盐缓冲液缓慢搅拌透析6h使之结合,然后吸出加NaBH4溶液(5mg/ml)02ml,置冰箱2h。
elisa试剂盒的制备流程二:
ELISA试剂盒 结合物中辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)与抗体量的测定酶标结合物于751型分光光度计上分别用280及403nm波长测定其光密度(OD),并计算出OD403与OD280之比值以及HRP与抗体的mol/L比。
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