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哈灵实验室教大家如何正确复苏细胞
点击次数：1466 更新时间：2015-05-21
 

   哈灵实验室教大家如何正确复苏细胞

细胞冻存好了，接下来要注意什么问题呢?没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢?细胞活力和形态检查的作用何在?今天就为大家一一解答。

一、活力检查：千万不要使用不健康的细胞，可能有污染(真菌、支原体等)，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!

二、形态检查：检查细胞的固有形态和生长行为。

三、冻存细胞：

1. 补充新的培养液：在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。在细胞长至70%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度 ~5 x106 cells/ml (根据不同的细胞类型调整)

2. 冻存液：用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞，有不同类型的冻存液，根据细胞类型选择合适的冻存液。

在冻存管上标记好细胞类型，日期，冻存人等信息，并保证每冻存管不超过1.5ml.。程序降温是保证冻存细胞活性的关键，使用 Mr. Frosty(找生物注一种装置)保证降温速度为1°-3°C，置于-80°C冰箱内*夜，如果没有Mr. Frosty装置，可以使用实验室常见的泡沫盒、棉花等。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以快的速度转移冻存管知液氮罐内，因此，此步骤使用干冰，或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意，在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息，做好记录是非常非常重要的!

四、细胞复苏：正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要，当从液氮罐内取出细胞时，有可能会出现冻存管破裂的情况，使用保护面罩和防护服十分必要。从液氮内转移冻存管至热的(温度高的)容器内，应在液氮内完成。应该与37℃水浴中快速溶解冻存的细胞，并保证冻存管盖子在水面之上以避免污染。当小的冰块溶解后，用70%酒精擦拭冻存管，并迅速转移至新的已经预热的培养基内。观察细胞生长形态和生长比率。

其实，细胞复苏只是一个简单的实验，不过这其中却不可避免有一些需要注意的细节，不然，也不一定会尽如人意。例如说，人身健康方面：一定要记得做好防冻工作，戴上护目镜;尽量降低DMSO对细胞的损伤等等。

如有其他不了解的相关方面，还可以直接我公司，我们有专业技术人员为您解答，期待您的来电！