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细胞蛋白激酶A（PKA）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
细胞蛋白激酶A（PKA）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过多肽底物受到PKA磷酸化后，进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应， 即采用比色法测定其氧化后峰值的变化，以分析细胞裂解样品中PKA活性的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或*纯化酶样品中PKA激酶的定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。
技术背景

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蛋白激酶A（protein kinase A；PKA），又称cAMP依赖性蛋白激酶（cAMP dependent protein kinase），是第二信使依赖性酶。通过影响腺苷酸环化酶（adenylate cyclase；AC）和磷酸二酯酶（phosphodiesterase）的活性，而决定cAMP水平，达到调节PKA活性，进而调节细胞对于各种外部刺激的反应，包括细胞生长、代谢、DNA复制、细胞分裂、肌动蛋白细胞骨架重排等。该全酶（holoenzyme）具有两个催化亚体和两个调节亚体构成的四联体结构。cAMP结合调节亚体，而释放出活化的催化亚体，产生目标蛋白上丝/苏氨酸（serine/threonine）的磷酸化，诸如CREB、Histone H1、CREM、NF-κB和核受体等，而调控一系列细胞活动。其磷酸化目标序列为Arg-Arg-X-Ser/Thr或Lys-Arg-X-X- Ser/Thr。蛋白激酶A 至少有两个亚酶：I型亚酶存在于胞浆内，而二型亚酶与细胞膜、细胞器和细胞骨架相关。基于底物XXXXXX，在ATP的存在下，受到PKA激酶的磷酸化，获得产物磷酸化多肽，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其峰值的变化（340nm），来定量分析蛋白激酶A的活性。其反应方式为：
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
缓冲液（Reagent C） 毫升
酶促液（Reagent D） 微升
反应液（Reagent E） 微升
底物液（Reagent F） 微升
阴性液（Reagent G） 微升