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冰冻切片组织线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂盒产品
点击次数：1167 更新时间：2016-03-15
 

保存方式

 

保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

 

用户自备

 

1.5毫升离心管：用于染色工作液配制和组织细胞染色的容器

培养箱：用于染色孵育

（共聚焦）荧光显微镜：用于组织细胞荧光分析

 

 

实验步骤

 

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，中和液（Reagent C）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升中和液（Reagent C），混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。

  

  • 准备5片待测的厚为10微米的未经固着处理的冰冻切片
  • 置于室温下，小心加上xx微升预冷的清理液（Reagent A），铺满整个切片表面
  • 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
  • 小心加上xx微升室温预热的染色工作液，铺满整个切片表面
  • 在37℃湿润培养箱里，孵育30至60分钟（注意：避免液体蒸发）
  • 小心移去切片上的染色工作液，避免光照
  • 小心加上xx微升清理液（Reagent A），铺满整个切片表面
  • 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
  • 重复实验步骤7和8一次
  • 放上盖玻片或封片
  • 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下观察（定性检测）：激发波长488nm，散发波长505nm――绿色荧光减弱，表明膜通道孔活性（MPTP）增强

注意事项

 

  • 本产品为50次操作
  • 操作时，避免污染母液
  • 操作时，须戴手套
  • 建议使用新鲜组织（手术切除后1小时内）制成的冰冻切片
  • 染色前，所有试剂溶液，除染色液（Reagent B）外，需37℃预热
  • 建议组织染色完成后，即刻进行荧光检测分析 
  • 孵育时，必须避免光照
  • 本产品友好使用于双重染色或重叠染色
  • 如果不具备505nm散发波长的滤波器，可以使用505nm至530nm中的任一波长
  • 本公司提供膜通道孔抑制剂： 0.2毫摩尔环胞素A（cyclosporine A）－12226，维护荧光完整
  • 本公司提供系列线粒体分析试剂产品