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人沙门氏菌（Salmonella）Elisa试剂盒说明书

Human Salmonella Elisa kit instructions
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T/48T
一、使用目的：在使用本试剂盒时，用于测定人的血清、血浆及相关液体样本中沙门氏菌（Salmonella）表达症状，暂不做临床医学实验使用。
实验原理:应用的原理方法是双抗体夹心法测定标本中人沙门氏菌（Salmonella）表达症状。用纯化的人沙门氏菌（Salmonella）抗体进行包被微孔板后，制成固相抗体，可与样品中沙门氏菌（Salmonella）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的沙门氏菌（Salmonella）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人沙门氏菌（Salmonella）的存在与否。
二、人沙门氏菌（Salmonella）Elisa试剂盒组成:
1.30 倍浓缩洗涤液   20ml*1瓶             7.终止液   6ml*1瓶
2.酶标试剂          6ml*1瓶              8.阳性对照 0.5ml*1瓶
3.酶标包被板        12孔*8条             9.阴性对照 0.5ml*1瓶
4.样品稀释液        6ml*1 瓶             10.说明书 1份
5.显色剂A 液        6ml*1 瓶             11.封板膜 2张
6.显色剂B 液        6ml*1/瓶             12.密封袋 1个
三、操作步骤:
1.编号：对应微孔将样品按序编号，每块板上应设定阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔。
2.加样：加样时，分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。
3.温育：用封板膜封板后，放在37℃水中温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：再一次用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
8.洗涤：再一次小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算和结果判定：
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为沙门氏菌（Salmonella）阳性
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为沙门氏菌（Salmonella）阴性。
四、注意事项
1.操作过程应严格按照说明书进行，不同批号组不得混用。
2.从冷藏环境中取出试剂盒时，应该在室温平衡15到30分钟以后，才可以进行使用，酶标包开封后如未用完，板条应装入密封袋中低温冷冻保存。
3.封板膜只限一次性使用。如一次未用完，应舍弃封板膜，以避免交叉污染。
4.试验结果的鉴定一般以酶标仪读数为，在使用双波长检测时，参考波长为630nm。
5.在处理废物环节时，所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物的处理方法处理。终止液为2M 的硫酸，使用时必须注意使用安全。
6.人沙门氏菌Elisa试剂盒保存的条件及有效期:
  1.试剂盒保存温度：2-8℃。
  2.有效期：6个月

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