目的：研究使用此试剂本试剂盒测定大鼠血清，血浆， 基质金属蛋白酶2（MMP-2）含量的上清液样品。 实验原理： 大鼠基质金属蛋白酶检测样品，本试剂盒的双抗体夹心法（MMP-2）水平的2。与纯 大鼠基质金属蛋白酶2（MMP-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，单克隆抗体的多孔涂层 基质金属蛋白酶2（MMP-2），然后加入MMP-2抗体、HRP标记的抗体结合，形成 抗体复合物酶与底物TMB显色，*清洗后。TMB HRP催化酶转化 在酸的作用下进入决赛的黄色。基质金属蛋白酶的颜色深度和样品中的2（MMP 正相关。测得的吸光度在450nm波长与ELISA（OD值），通过标准曲线计算样品 基质金属蛋白酶2（MMP-2）浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保 标准品：450μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保 标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保 酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保 浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后， 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该 离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-30 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液， 浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待 检测，其余冷冻备用。 6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤： 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二 孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混 匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl， 浓度分别为300μg/L，200μg/L，100μg/L，50μg/L，25μg/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样 品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值 大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计 算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 计算： 标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标， 在坐标纸上绘制标准曲线，根据OD样品 从标准曲线查出相应的浓度值乘以稀释； 多；或与标准浓度与标准计算 标准曲线的线性回归方程，样本的OD值 方程，计算样品浓度，再乘以稀释 多，为样品的实际浓度 （此图仅供参考） 试剂盒性能： 1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。 2.批内与批见应分别小于9%和11% 检测范围： 20μg/L-400μg/L 保存条件及有效期： 1.试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月 |
ELISA（酶免）试剂盒
人ELISA试剂盒
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