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主要用途

 组织乙酰辅酶A羧化酶（ACETYL-COA CARBOXYLASE）活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过底物乙酰辅酶A和碳酸氢盐受到乙酰辅酶A羧化酶的催化反应后，进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应， 即采用光度法测定其氧化后峰值的变化，以分析组织裂解样品中乙酰辅酶A羧化酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或*纯化酶样品中乙酰辅酶A羧化酶活性的定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。

技术背景

乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl CoA Carboxylase；ACC；EC6.4.1.2），又称为乙酰辅酶A碳酸氢盐连接酶（Acetyl CoA：bicarbonate ligase-ATP），是ATP依赖性含生物素酶，参与脂肪酸生物合成。哺乳动物乙酰辅酶A羧化酶单体分子量为225－250Kd，含有许多磷酸化位点，以及1个生物素辅基位点、2个催化位点和1个异构（allosteric）位点。乙酰辅酶A羧化酶催化生物素辅基（prosthetic group）的羧基化反应，然后将生物素上的羧基转移到辅酶A上，产生丙二酰辅酶A（malonyl CoA），成为长链脂肪酸合成前的关键步骤。AMP活化蛋白激酶（AMP-Activated Kinase；AMPK）调节该酶的活性，而十四烷基氧糠酸（5-(tetradecyloxy)-2-furoic acid；TOFA）抑制该酶的活性。基于底物乙酰辅酶A（acetyl CoA）和碳酸氢盐，在ATP的存在下，受到乙酰辅酶A羧化酶的催化，获得产物丙二酰辅酶A和ADP，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的变化（340nm），来定量分析乙酰辅酶A羧化酶的活性。其反应方式为：

Acetyl CoA Carboxylase

Acetyl Co-A  +  ATP  +  HCO3  →  Malonyl CoA  +  ADP  +  Pi

pyruvate kinase

Phosphoenolpyruvate  +  ADP       →      pyruvate  +  ATP

lactate dehydrogenase

pyruvate  +  NADH       →      lactate  +  NAD+

           （高吸收峰） （低吸收峰） 

产品内容

 清理液（Reagent A）         60毫升

 裂解液（Reagent B）         10毫升

 缓冲液（Reagent C）   20毫升

 酶促液（Reagent D）   2毫升

 反应液（Reagent E）   2毫升

 底物液（Reagent F）         2毫升

 阴性液（Reagent G）   500微升

 产品说明书   1份

保存方式

保存 清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品保存的容器

15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器

DOUNCE匀浆器：用于裂解组织

（微型）台式离心机：用于样品预处理

1厘米光径比色皿或96孔板：用于光度分析操作的容器

分光光度仪或酶标仪：用于样品光度分析