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糖蛋白电泳高碘酸希尔法阿尔新蓝染色试剂盒产品说明书 

主要用途

糖蛋白电泳高碘酸希尔法阿尔新蓝染色试剂是一种旨在通过阿尔新蓝和高碘酸希尔方法的结合，所产生的蓝色和紫红色，来识别蛋白电泳中不同糖蛋白的而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于各种蛋白电泳分析中糖蛋白成分检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

阿尔新蓝（alcian blue）染料是一种水溶性的铜酞菁基团（cuprophthalocyanine group）的碱性染料。由于分子中铜的存在，而呈现蓝色。在低pH的环境下，阿尔新蓝与多价阴离子硫酸化（sulfated）和羧化（carboxylated）自由基的多价阴离子反应，例如酸性粘多糖蛋白（acidic mucopolysaccharide）、唾液粘多糖蛋白（sialomucins）以及糖蛋白，和酸性基团形成盐键（salt linkage），呈现（通常高碘酸希尔法阴性）蓝色。高碘酸（periodic acid）可以氧化糖蛋白中的多糖（polysaccharide）糖基，包括乙二醇（1,2-glycol）中的碳原子，成为乙醛基团（aldehyde group），与希尔试剂（Schiff’s Reagent），即品红亚硫酸盐染料（fuchsin sulfite）发生反应，呈现品红色（magenda）或紫红色，表明中性粘多糖蛋白阳性。在糖蛋白电泳上，使用高碘酸希尔法阿尔新蓝染色技术，可以检测到25至100纳克的糖蛋白。

产品内容

固定液（Reagent A）  250毫升

染色液A（Reagent B）   50毫升

氧化液（Reagent C）   50毫升

染色液B（Reagent D）   50毫升

还原液（Reagent E）   50毫升

保存液（Reagent F）   50毫升

产品说明书    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液A（Reagent B）和染色液B（Reagent D），严格密封瓶口，避免光照； 试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月

用户自备

100毫升烧杯：用于配制工作液的容器

塑料盘：用于染色的容器

无离子水：用于稀释试剂溶液

平式摇荡仪：用于染色操作时的孵育

实验步骤

实验开始前，完成SDS-PAGE蛋白电泳的运行，取出6cm X 8cm 的胶体，作好定向标记，然后进行下列操作：

• 准备6个100毫升的烧杯，作好1至6号标记
• 移取50毫升固着液（Reagent A）到1号烧杯，加入50毫升用户自备的无离子水，充分混匀
• 加入到8cm X 10cm 大小的染色盘
• 将聚丙烯酰胺凝胶放进染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育30分钟，速度为50RPM（注意：如果用户需要暂停，可以过夜，但注意液体挥发）
• 小心倒掉染色盘里的固着液（Reagent A）
• 加入100毫升用户自备的无离子水
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育10分钟，速度为50RPM
• 小心倒掉染色盘里的无离子水
• 重复实验步骤7至9一次
• 移取10毫升染色液A（Reagent B）到2号烧杯，加入90毫升无离子水，充分混匀
• 加入上述配制的100毫升2号烧杯里稀释的染色液A（Reagent B）到染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育60分钟，速度为50RPM，或直至呈现蓝色条带为止，严格避免光照
• 小心倒掉染色盘里的染色液A（Reagent B）
• 加入100毫升用户自备的无离子水
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育10分钟，速度为50RPM
• 小心倒掉染色盘里的无离子水
• 重复实验步骤15至17二次
• 移取10毫升氧化液（Reagent C）到3号烧杯，加入90毫升无离子水，充分混匀
• 加入上述配制的100毫升3号烧杯里稀释的氧化液（Reagent C）到染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育60分钟，速度为50RPM
• 小心倒掉染色盘里的氧化液（Reagent C）
• 加入100毫升用户自备的无离子水
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育10分钟，速度为50RPM
• 小心倒掉染色盘里的无离子水
• 重复实验步骤23至25二次
• 移取10毫升染色液B（Reagent D）到4号烧杯，加入90毫升无离子水，充分混匀
• 加入上述配制的100毫升4号烧杯里稀释的染色液B（Reagent D）到染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育60分钟，速度为50RPM，或直至呈现品红色条带为止，严格避免光照
• 小心倒掉染色盘里的染色液B（Reagent D）
• 移取10毫升还原液（Reagent E）到5号烧杯，加入90毫升无离子水，充分混匀
• 加入上述配制的100毫升5号烧杯里稀释的还原液（Reagent E）到染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育60分钟，速度为50RPM，或直至背景清晰
• 小心倒掉染色盘里的还原液（Reagent E）
• 加入100毫升用户自备的无离子水
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育10分钟，速度为50RPM
• 小心倒掉染色盘里的无离子水
• 重复实验步骤35至37一次（注意：条带更加清晰）
• 移取10毫升保存液（Reagent F）到6号烧杯，加入90毫升无离子水，充分混匀
• 加入上述配制的100毫升6号烧杯里稀释的保存液（Reagent F）到染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育30分钟，速度为50RPM，或过夜至次日处理
• 直至完成所有拍照和分析：呈现蓝色或紫红色为糖蛋白阳性条带

注意事项

• 本产品为5次（50至75个样本）操作
• 操作时，须戴手套
• 所有操作在室温下和通风柜里进行
• 试剂具有腐蚀性，注意操作安全
• 建议蛋白上样量为30至100微克
• 染色液B（Reagent D）出现沉淀，可以温热、搅拌或过滤后使用
• 染色液B（Reagent D）须密封避光，如果变成红色，则影响染色效果
• 确保胶体浸泡在试剂液体里
• 染色时，严格避免光照
• 染色避免过度，肉眼可见深蓝色或深红色即可终止染色
• 染色通常20分钟即可显色，如果样本浓度过低，可以增加染色时间至2小时
• 胶体如果达到1.5毫米厚，可以增加所有试剂处理时间一倍
• 本产品可以用于西方杂交的蛋白印迹膜的糖蛋白染色
• 本公司提供系列糖蛋白分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰