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PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒产品说明书

点击次数:3736 发布时间:2018/3/9
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PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒产品说明书 主要用途 PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来定量样品中DNA含量的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,高度敏感。 技术背景 作为DNA染色剂之一的PicoGreen荧光染料特异性地与样品中双链DNA结合,产生荧光信号。PicoGreen技术可以检测到低达0.5纳克双链DNA的变化。DNA的微量增加引起荧光信号强度(Intensity)或相对荧光单位(RFU)的显著增加。其自发荧光(Autofluorescence)忽略不计,重复性标准差异(Standard Deviation)低,不受样品化学成分的干扰。 产品内容 染色液(Reagent A) 62.5微升 稀释液(Reagent B) 15 毫升 标准液(Reagent C) 1毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存染色液(Reagent A)和标准液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,染色液(Reagent A)避免光照,有效保证6月 用户自备 1.5毫升离心管:用于工作液配制的容器 比色皿或96孔板:用于荧光分析的容器 荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光定量分析 实验步骤 一、测定准备 1.准备好待测样品,置于冰槽里 2.设定好荧光分光光度仪(温度为37℃):激发波长480nm,散发波长530nm,并置零 3.实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀释液(Reagent B)到新的15毫升离心管,加入25微升染色液(Reagent A),混匀后,用锡纸包裹,标记为染色工作液,放在暗室里。然后进行下列操作。 二、构建标准曲线 1.准备好5个1.5毫升离心管,标记为1至5号管 2.分别加入500微升稀释液(Reagent B)到每个离心管 3.移取500微升标准液(Reagent C)到1号管,混匀 4.小心移取500微升1号管稀释的标准液(Reagent C)到2号管,混匀 5.小心移取500微升2号管稀释的标准液(Reagent C)到3号管,混匀 6.小心移取500微升3号管稀释的标准液(Reagent C)到4号管,混匀 7.将1至5号管放进冰槽里备用;标准管含量见下表 管号 缓冲液(Reagent B) 标准液(Reagent C) 标准DNA总量 1 500微升 500微升 1微克 2 500微升 500微升1号管 0.5微克 3 500微升 500微升2号管 0.25微克 4 500微升 500微升3号管 0.125微克 5 500微升 空对照 0 8.移取500微升含有染色液(Reagent A)和稀释液(Reagent B)的染色工作液到新的比色皿 9.加入500微升上述配制的标准液 10.室温下,孵育5分钟,避免光照 11.即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU) 12.重复实验步骤8至11四次 13.绘制标准曲线:纵座标(Y轴)为相对荧光单位(RLU);横坐标(X轴)为DNA含量(微克) 三、样品检测 1.移取500微升含有染色液(Reagent A)和稀释液(Reagent B)的染色工作液到新的比色皿 2.加入500微升待测样品 3.室温下,孵育5分钟,避免光照 4.即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU) 5.根据标准曲线获得样品对应DNA含量(微克) 6.样品实际DNA浓度: [根据标准曲线获得样品对应DNA含量(微克)X样品稀释倍数]0.5(样品容量;毫升)=微克/毫升 注意事项 1.本产品为20次(比色皿)和100次(96孔板)操作,包括标准曲线测定 2.操作时,须戴手套 3.使用新鲜配制的染色工作液,务必不要超过2小时,且注意避光 4.建议使用塑料管配制染色工作液,而不是玻璃制品 5.孵育时,避免光照 6.系统检测,标准曲线测定1次即可;如果仪器更换,则需要重新测定1次 7.如果荧光读数过高,可以相应稀释样品量 8.可以使用荧光酶标仪检测,试剂用量和体系均除以5,包括标准DNA含量,其计算公式: [根据标准曲线获得样品对应DNA浓度(微克)X样品稀释倍数]÷0.1(样品容量;毫升)=微克/毫升 9.盐类、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链DNA和RNA不会干扰检测 10.本公司提供系列DNA检测试剂产品 质量标准 1.本产品经鉴定性能稳定 本产品经鉴定高度敏感