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丙二醛（MDA）终点比色法定量检测试剂盒产品说明书 主要用途 丙二醛（MDA）终点比色法定量检测试剂是一种旨在通过TBARS（硫代巴比妥酸反应物）技术，检测与之反应的丙二醛，其产物丙二醛双硫代巴比妥酸加合物，在分光光度仪下，检测其吸光峰值的变化，即采用比色法测定样品中总丙二醛含量的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物、人体等细胞、组织、血液、体液、培养液丙二醛的含量检测。广泛用于细胞氧化应急研究，特别是脂质过氧化的分析。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，重复性好。 技术背景 脂质过氧化反应（lipid peroxidation；LPO）是动物和植物细胞损伤的一种机制，也是评价细胞和组织氧化应急的标志。含有两个或以上双键（double bond）的多不饱和脂肪酸（Polyunsaturated Fatty Acid）对自由基以及其它活性氧化族高度敏感，导致产生脂质过氧自由基LOO＋（lipid peroxyl radical），使脂类氧化（lipid oxidation）。脂质过氧化自由基LOO＋同时通过攻击分子内双键，经环化、裂解形成环状内过氧化物（cyclic endoperoxide），例如丙二醛（malondialdehyde；MDA）。作为脂质过氧化性低分子量终端产物之一的丙二醛，广泛用于脂质过氧化反应的指标。在丁羟甲苯（Butylated Hydroxytoluene；BHT）和EDTA的参与帮助减少干扰性脂类氧化的情况下，丙二醛与硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid；TBA）进行反应，产生丙二醛双硫代巴比妥酸加合物（MDA－TBA2），通过分光光度仪（532nm波长）来定量分析丙二醛的含量，其反应方式为： malondialdehyde +2 thiobarbituric acid → MDA－TBA2 产品内容 抗干扰液（Reagent A） 500微升 萃取液（Reagent B） 1.25毫升 反应液（Reagent C） 5管 补充液（Reagent D） 10毫升 稀释液（Reagent E） 1.5毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里，抗干扰液（Reagent A）和反应液（Reagent C）避免光照，并密封；萃取液（Reagent B）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月 用户自备 恒温培养箱：用于反应孵育 酶标板：用于比色的容器 酶标仪：用于样品比色分析 实验步骤 实验开始前，将试剂盒中的反应液（Reagent C） 置入冰槽里。移取250微升稀释液（Reagent E）到 反应液（Reagent C）管里，涡旋混匀，标记为反应工作液（10次操作量）。同时设定好酶标仪（温度为25℃）：波长532nm，并置零。然后进行下列操作。 1．准备好1个96酶标板孔，并做好相应标记：背景对照和样品 2．分别移取140微升补充液（Reagent D） 3．分别加入10微升抗干扰液（Reagent A） 4．分别加入50微升补充液（Reagent D）或待测样品（注意：总量为1至2毫克总蛋白） 5．用枪头混匀 6．分别加入25微升萃取液（Reagent B） 7．用枪头混匀 8．分别加入25微升反应工作液 9．轻轻摇动酶标板，混匀 10．放进60℃恒温培养箱，孵育60分钟 11．放进酶标仪检测 12．样品实际读数：（样品读数－背景对照读数） 13．计算样品总浓度 [样品实际读数X样品稀释倍数X 0.25（毫升，测定容量）]÷[0.05（样品容量，毫升）X 156（毫摩尔吸光系数）X 0.6]＝微摩尔/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝微摩尔/毫克 注意事项 1．本产品为50次（96孔板）操作 2．操作时，须戴手套 3．萃取液（Reagent B）具有腐蚀性，注意操作安全 4．反应液（Reagent C）为固体，避免在室温下放置；配制后，有效期1周 5．抗干扰液（Reagent A）和反应液（Reagent C）避免光照，并密封 6．本产品检测敏感度可达0.05微摩尔丙二醛 7．50微摩尔的过氧化氢会干扰检测（使丙二醛减少13％）；而蔗糖和果糖则不影响检测 8．如果样品含有过高的蛋白成分，建议进行样品去蛋白处理 9．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度 10．正常样品的丙二醛浓度相当低，约在皮摩尔水平，即10至100皮摩尔/毫克蛋白 11．本公司提供系列丙二醛检测试剂产品 质量标准 1．本产品经鉴定性能稳定 2．本产品经鉴定检测敏感