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HL10014.5 v.A 真菌/酵母氧化酶活性测定试剂盒产品说明书 

主要用途 真菌/酵母氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过氧化酶反应系统中还原性氧化后吸光峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、 成功实验证明的。其适用于各种真菌或酵母株裂解悬液中氧化酶的活性检测。产品严格无 菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景 氧化酶（Cytochrome c oxidase）存在于真核生物的线粒体上（包括真菌和酵母细胞），主要 通过氧化磷酸化为细胞提供能量。基于底物还原型（reduced cytochrome c），受到氧 化酶的催化，转化为氧化型（oxidized cytochrome c），在分光光度仪下，出现吸光值的变化（550nm 波长），由此定量测定氧化酶的活性。氧化酶反应系统为：

Cytochrome c oxidase 4 cytochrome c2＋ + 8H+ + O2 → 4 cytochrome c3+ + 2H2O + 4H+ 还原型 氧化型 （高吸收峰） （低吸收峰）

注意事项 1． 本产品为 20 次操作，包括背景对照 2． 操作时，须戴手套 3． 样品中忌用 DTT 和巯基乙醇等处理 4． 强化液（Reagent B）为固体状，移取方法为：使用 1 毫升枪头，将部分剪去；或使用 0.5 毫升 PCR 管的盖子内圈盛满；或秤重 0.1 克 5． 建议测定细胞裂解悬液的蛋白浓度，便于计算活性单位之需；建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量检测 试剂盒（30030.1） 6． 每增加 1 个样品，增加反应工作液为：反应液（Reagent E）100 微升＋稳定工作液 3 微升，以此类推。 配制反应工作液时，须根据样本数量配制实际工作液容量 7． 系统操作过程中，背景测定只需 1 次 8． 分光光度计波长严格设置在 550nm，误差 10nm 将不产生信号 9． 加样后 3 秒内进行比色测定 10．比色测定后，比色皿须清洗* 11．比色皿背景空对照 0 秒读数通常大于 0.2 为理想状态；建议使用比色皿测定 12．背景空对照的正常读数差值（0 秒－60 秒）通常为 0.001 至 0.005（正负即可） 13．样品 0 秒读数通常和背景空对照 0 秒读数一致 14．样本测定 60 秒读数低于 0 秒读数表明具有酶活性15．酶活性单位浓度定义：在 28℃室温下，pH 7.0 的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）氧化 1 微 摩尔的16．建议待测样本总蛋白浓度为 50 微克/100 微升；如果样本酶活性过低或过高，即 60 秒读数不变或为零， 则可以增加或降低样本量（本公司提供 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒 30030.1） 17．本公司提供系列细胞色素相关试剂产品 质量标准 1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定检测敏感

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