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荧光定量pcr测试剂盒反应体系
点击次数：1465 更新时间：2013-08-09
 

PCR检测试剂盒反应体系

 

  SYBR Green I 是一种于小沟中的双链 DNA 染料。与双链 DNA 后，其荧光大大增强。这一性质使其用于扩增产品的检测十分理想。 SYBR Green I 的大吸收波长约为 497nm ，发射波长大约为 520nm。在 PCR反应系统中，参加过量 SYBR 荧光染料， SYBR 荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的 SYBR 染料分子不会发射任何荧光信号，然后确保荧光信号的添加与 PCR 产品的添加*同步。

 

  SYBR Green I 在核酸的实时检测方面有许多优点，因为它与一切的双链 DNA 相，不用因为模板不一样而格外定制，因而设计的程序通用性好，且价格相对较低。使用荧光染料能够指示双链 DNA 熔点的性质，通过熔点曲线分析能够辨认扩增产品和引物二聚体，因而能够区别非特异扩增，进一步地还能够完成单色多重测定。此外，因为一个 PCR 产品能够与多分子的染料，因而 SYBR Green I 的灵敏度很高。可是，因为 SYBR Green I 与一切的双链 DNA 相结合，因而由引物二聚体、单链二级布局以及过错的扩增产品导致的假阳性会影响定量的性产生偏差。经过测量升高温度后荧光的改变能够协助下降非特异产品的影响 。由解链曲线来剖析产品的均一性有助于剖析由 SYBR Green I 得到定量成果。

 

 

PCR检测试剂盒反应体系 2

 

  LUX （light upon extention） 引物是利用荧光符号的引物完成定量的一项新技术。目标特异的引物对中的一个引物 3’ 端用荧光报告基团标记。在没有单链模板的情况下，该引物本身匹配，构成发夹结构，使荧光淬灭。在没有目标片断的时候，引物与模板匹配，发夹结构打开，产生特异的荧光信号。