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支原体污染检测试剂盒（PCR法）说明-上海哈灵
点击次数：1255 更新时间：2013-08-10
 
上海哈灵支原体污染检测试剂盒（PCR法）-上海哈灵

（PCR Mycoplasma Detection Kit）
Cat number：YS012
Store at -20℃ for one year
Expire date：
For Research Use Only
 
一、 上海哈灵支原体污染检测试剂盒说明：

    本试剂盒经过PCR法对细胞培育物、动物分泌物等多种生物资料进行支原体污染检测。常规培养法进行支原体检测通常需求几天的时间，而本试剂盒经过PCR扩增及电泳分析进行支原体检测只需要几个小时，既方便又快捷。本试剂盒的多对引物能特异性扩增多种支原体rRNA基因片段，一次就能够检测至少11种的支原体，包含M. fermentans，M. hyorhinis，M. arginini，M. orale，M. salivarium，M. hominis，M. pulmonis，M. arthritidis, M. neurolyticum, M. hyponeumoniae, M. capricolum 等。其原理是原核生物的rRNA碱基序列十分保守，而rRNA操纵子上编码rRNA的DNA间隔区如16S和23S间隔区，各种生物种间的碱基序列不一样很大。这个间隔区的DNA序列及长度在支原体各个种间既有相对保守的部分，也有具有很大区别的部分。因而能够在编码16S和23S rRNA的DNA上设计一对引物，扩增编码16S和23S rRNA的DNA间隔区，然后在编码16S和23S rRNA的DNA间隔区的保守区上设计一条引物，在编码23S rRNA的DNA上设计一条引物进行嵌套式PCR。能特异性检测出支原体DNA，检测灵敏度与特异性都很高。
 
二、上海哈灵支原体污染检测试剂盒组份：

    组份 012（20 assays） 贮存条件  10×Taq Buffer（不含Mg2＋） 1.0 mL -20℃  MgCl2（25mM） 1.0 mL -20℃  Taq DNA Polymerase（5 U /μl） 100 U -20℃  Myc F1 Primer （10μM） 50μL -20℃  Myc R1 Primer（10μM） 50μL -20℃  Myc F2 Primer（10μM） 50μL -20℃  Myc R2 Primer（10μM） 50μL -20℃  Control Template（1 ng/μl） 50μL -20℃  DNA溶解液 2 mL -20℃  ddH2O 5 mL -20℃  
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
电泳仪、离心机、PCR仪、凝胶成像仪、微量移液器、dNTPs（10mM）、琼脂糖、溴化乙锭等
四、运用注意事项
整个试验，必须标准操作，反应系统的配置、样本处置及加样、PCR扩增应分区域进行，以避免交叉污染。 
 
上海哈灵支原体污染检测试剂盒操作方法：

1.收取待检样品（细胞通常成长至80％左右即可，贴壁细胞不宜用消化液消化细胞，可以运用细胞刮刮取细胞），然后取细胞悬液200ul（约1～3×105细胞数）至离心管，12000rpm离心5～10min；去除上清，加入50ul DNA溶解液，充分悬浮沉淀物，沸水浴5min；样品运用前12000rpm离心5～10min，取上清4ul作为PCR反应模板；剩下样品能够-20℃保藏。样本有时也能够直接用污染液直接做PCR反应。
上海哈灵支原体污染检测试剂盒PCR反应：

*步PCR：
50μL系统PCR反应（如客户需求运用更小量的反应系统，试剂加样量按份额进行削减）：
（1）．使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s；
（2）．取灭过菌的0.2mL离心管，在冰上顺次参加
10×Taq Buffer                   5  μL
dNTPs （10mM）                  1  μL
MgCl2 （25mM）                  4  μL
Myc F1 （10μM）                 1  μL
Myc R1 （10μM）                 1  μL
DNA样品                      1~5 μL
Taq DNA Polymerase             0.5 μL
ddH2O up to                     50 μL
（3）．轻轻混匀，2000rpm离心20s；
（4）．进行PCR扩增
PCR扩增条件：
94°C，5min；
94°C，30 sec；55°C，2min；72°C，1 min；32 Cycles；
72°C，10 min，
第二步PCR：
50μL系统PCR反应（如客户需求运用更小量的反应系统，试剂加样量按份额进行削减）：
（1）．使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s；
（2）．取灭过菌的0.2mL离心管，在冰上顺次加入
10×Taq Buffer                   5  μL 
dNTPs （10mM）                  1  μL
MgCl2 （25mM）                  4  μL
Myc F2 （10μM）                 1  μL
Myc R2 （10μM）                 1  μL
*步产品                    1~5 μL
Taq DNA Polymerase             0.5 μL
ddH2O up to                     50 μL
（3）．轻轻混匀，2000rpm离心20s；
（4）．进行PCR扩增
PCR扩增条件：
94°C，5min；
94°C，30 sec；55°C，2min；72°C，1 min；32 Cycles；
72°C，10 min，
3.反应完毕后，取反应液10μL进行琼脂糖凝胶电泳，承认PCR反应产品。若是此PCR产品需用于今后试验，应将PCR产品冷冻保管。
4.依据感染支原体类型的不一样，扩增产品大小有所不一样，*步PCR产品在350～700bp 之间，第二步PCR产品在150～250bp之间。
线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）
TRAP-PCR端粒酶活性检测试剂盒
以上信息为上海哈灵支原体污染检测试剂盒的详细内容！