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本页描述的产品仅供科学实验研究使用，不用于临床，非医疗器械，不做其他用途。

产品编号：10387.1

名称：活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒    

规格：20次

价格：客服

活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒保存方式：

保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

24孔细胞培养板：用于贴壁细胞染色的容器
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
微型台式离心机：用于沉淀细胞
培养箱：用于染色孵育

（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于细胞荧光定量分析
细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤

• 贴壁细胞染色
• 准备1个细胞培养24孔板的待测细胞（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项8）
• 小心抽去细胞培养液
• 小心沿着孔壁加入xx微升37℃预热的清理液（Reagent A）到1个细胞培养孔，覆盖培养孔表面
• 小心抽去清理液
• 小心沿着孔壁加入xx微升染色液（Reagent B）到1个细胞培养孔，覆盖培养孔表面
• 放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟，避免光照
• 小心抽去染色液（Reagent B）
• 小心沿着孔壁加入xx微升37℃预热的清理液（Reagent A）到细胞培养孔
• 小心抽去清理液
• 重复实验步骤8和9一次
• 小心沿着孔壁加入xx微升37℃预热的清理液（Reagent A）到细胞培养孔
• 选择下列方式之一进行操作：

（A）使用倒置荧光显微镜观察（定性检测）：

激发波长490nm，散发波长528nm――绿色荧光增强，表明膜通透性（LMP）增强

激发波长555nm，散发波长617nm――红色荧光减弱，表明膜通透性（LMP）增强

• 使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：

激发波长490nm，散发波长528nm――RFU升高，表明膜通透性（LMP）增强

激发波长555nm，散发波长617nm――RFU降低，表明膜通透性（LMP）增强

二、悬浮细胞或脱离细胞染色

1．将悬浮细胞或脱离细胞（1 X 106细胞）移入到1.5毫升离心管
2．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
3．小心抽去上清液
4．加入xx微升37℃预热的清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
5．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6．小心抽去上清液
7．加入xx微升37℃预热的清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
8．加入xx微升含有染色液（Reagent B），充分混匀 
9．放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟，避免光照
10．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
11．小心抽去上清液
12．加入xx微升37℃预热的清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
13．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
14．小心抽去上清液
15．重复实验步骤12至14一次
16．加入xx微升37℃预热的清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
17．选择下列方式之一进行操作：
a)进行细胞流式仪分析：FL1（激发波长488nm，散发波长528nm），或FL3（激发波长555nm，散发波长617nm）观察10000个细胞以上――
FL1：波峰右移，表明膜通透性（LMP）增强
FL3：波峰左移，表明膜通透性（LMP）增强

b)或使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：
1）移取10微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片 
激发波长490nm，散发波长528nm――绿色荧光增强，表明膜通透性（LMP）增强
激发波长555nm，散发波长617nm――红色荧光减弱，表明膜通透性（LMP）增强

c)或使用荧光分光光度仪检测（定量检测）：
1）移取500微升上述细胞悬液到1毫升比色杯
2）加入xx微升清理液（Reagent A）
3）上下倾倒混匀数次
4）放进荧光分光光度仪：
激发波长490nm，散发波长528nm――RFU升高，表明膜通透性（LMP）增强
激发波长555nm，散发波长617nm――RFU降低，表明膜通透性（LMP）增强

注意事项

1．本产品为20次（0.5毫升体系/次）操作
2．操作时，须戴手套
3．操作时，避免污染母液
4．建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析 
5．孵育时，必须避免光照
6．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应

调整处理液：

操作容器    建议操作体系
载玻片    100微升
载玻片培养皿    1毫升
35mm培养皿    1毫升
96孔培养板    100微升
48孔培养板    200微升
24孔培养板    500微升
12孔培养板    1毫升
6孔培养板    2毫升
25cm2细胞培养瓶    3毫升

7．可以使用绿色荧光中激发波长490nm±20，散发波长528±38；红色荧光中激发波长555±28，散发波长617±50
8．用户可以持续读数5分钟，观察荧光读数的增强或减低，以表明荧光染料的移位变化  
9．本公司提供系列溶酶体分析试剂产品