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基因甲基化特异性PCR扩增(MSP)试剂盒
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基因甲基化特异性PCR扩增(MSP)试剂盒
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产品特点:
基因甲基化特异性PCR扩增(MSP)试剂盒是一种旨在通过设计符合胞嘧啶转化的特殊引物,对转化基因组的CpG岛区域进行PCR扩增,探测基因甲基化信息的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于父母印记、X染色体研究、肿瘤抑制基因等表观遗传学研究。产品即到即用,性能稳定,操作简便,扩增效率显著。
  基因甲基化特异性PCR扩增(MSP)试剂盒的详细资料:

本页描述的产品仅供科学实验研究使用,不用于临床,非医疗器械,不做其他用途。

产品编号:HL20024.2.1

名称:基因甲基化特异性PCR扩增(MSP)试剂盒 

规格:60次

价格:客服

技术背景

 

在基因的启动子区域(promotor region通常存在一些富含重复双核苷酸“”的区域,称为“岛”( island)。在人类基因组内,存在有近3万个岛。这些岛不仅是基因的一种标志,而且还参与基因表达的调控和影响染色质的结构,更是DNA甲基化的*位置。甲基化形态的扫描分析是基因表达和表观基因组学的主要课题。

 

产品内容

 

扩增液(Reagent A

补充液(Reagent B 毫升

产品说明书  1份

 

保存方式

 

保存在-20冰箱里有效保证6月

 

用户自备

 

转化样品:经过亚硫酸盐转化的目标DNA分子

特异引物:用于甲基化基因扩增的引导DNA分子

PCR仪:用于样品扩增

PCR管或平板:用于PCR反应的容器

 

实验步骤

 

实验开始前,从-20冰箱中取出试剂,放进冰槽里融化。然后进行下列操作:

 

  • 针对一个样本,每次移出xx微升扩增液(Reagent APCR
  • 加入1微升用户自备的的转化或野生型DNA样品(总量100纳克)
  • 分别加入1微升用户自备的甲基化特异性的引物F和引物R(各350纳克或25微摩尔)
  • 再加入xx微升补充液(Reagent B(反应总量为25微升)
  • 即刻放进微型台式离心机瞬时离心5秒,速度为500g(或2000RPM;例如eppendorf 5415
  • 加入50微升PCR矿物油(注意:参见注意事项10
  • 即刻进行热启动PCR反应:

温度(

时间

循环

95

9分钟

1

95

Tm

72

30秒

30秒

30秒

 

35

72

5分钟

1

 

  • 反应完毕后,移取5微升进行1.8%琼脂糖凝胶电泳或15%聚丙烯酰胺凝胶
  • 如果进行测序鉴定,胶回收PCR产物(建议使用高质纯化一步法胶回收试剂盒;HL20051.1 
  • 分别移出2微升反应液到2个不同的新的1.5毫升离心管(每微升100纳克)
  • 加入1微升用户自备的甲基化特异性的巢式引物F(每微升350纳克)到其中一个1.5毫升离心管,作好标记
  • 加入1微升用户自备的甲基化特异性的巢式引物R(每微升350纳克)到另一个1.5毫升离心管,作好标记
  • 进行后续的直接测序反应

 

注意事项

 

  • 本产品为60次操作
  • 操作时,须戴手套
  • 建议使用带滤芯的枪头,避免污染
  • 转化后的DNA样本须保存在-20冰箱里,否则容易降解;同时尽快进行扩增等后续操作
  • 一个特定基因的甲基化检测通常包括转化、PCR和直接测序三步。PCR用于筛选和定位,可以发现0.1%甲基化;测序是准确定位,是分析金标准
  • 一个特定基因的甲基化特异性PCR通常包括三组PCR: 
  • 甲基化特异性PCR的引物设计原则:引物以SENSE的DNA链为模板;引物含有足够多的C(后面不和G相连);引物含有1-3个位点;位点须在3端;PCR片段长度在80-250碱基;三组引物取自同一位点,通过长度变化获得相同的Tm,并在电泳上有所区别。
  • 直接测序的引物设计原则是:引物不能含有位点;引物含有足够多的C(不和G相连);采用巢式引物
  • 基因甲基化区域选择原则:如果是一个*检测的基因,首先,选择启动子部位;第二,选择足够多的位点;第三、 
  • 通过1.8%琼脂糖凝胶或15%聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测PCR扩增后的结果。假如DNA样品在修饰前是未甲基化的,那么仅仅“U”Primers将产生扩增产物;相反,已甲基化的DNA样品仅仅用“M”Primer能被扩增

         

  • 组织样品或杂合子样品常常出现“U”和“M”同时呈现阳性;建议使用基因甲基化程度定量分析试剂盒(HL20024.3)予以分析
  • 根据用户PCR仪的性能,决定是否加入矿物油(Mineral Oil)
  • 建议使用软件测算Tm温度在-20℃冰箱里储存的产品避免反复冻融
  • 本公司提供甲基化特异性引物设计服务
  • 本公司同时提供数字化表观基因组*分析(全部甲基化基因)技术试剂盒和外包服务(HL90002)
  • 本公司提供系列甲基化分析试剂产品

 

质量标准

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定转化保证
  • 本产品经鉴定无核酶污染
  • 本产品经鉴定反应产量高

 

产品相关关键字: 基因甲基化特异性 PCR扩增
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