脱氧核糖核酸酶 9003-98-9试剂是一种核酸内切酶,可随机切割双链DNA、单链DNA及DNA-RNA杂交链中的磷酸二酯键,生成带5'-磷酸末端的单核苷酸和寡核苷酸片段。其活性通常依赖Ca²⁺和Mg²⁺,最适pH约为7.0–8.0,易被EDTA等金属螯合剂抑制。DNase I常见来源为牛胰腺,也可通过重组表达获得;科研级产品常进一步降低RNase等杂酶活性,以减少对RNA实验的干扰。在科研实验中,DNase I常用于原代细胞制备或细胞培养过程中降解释放的基因组DNA,降低悬液粘度并减少细胞团聚;也可用于总RNA提取后的DNA去除、无细胞体系中的DNA模板消化、DNase足迹法分析蛋白-DNA相互作用,以及染色质可及性和核小体定位研究。使用时需根据实验目的选择是否保留Mg²⁺/Ca²⁺,并通过预实验优化浓度、温度和时间。酶溶液建议分装后低温保存,避免反复冻融。本品为科研专用试剂,非无菌、无内毒素控制,严禁用于人体、动物注射、食品或化妆品。
脱氧核糖核酸酶 9003-98-9试剂
5个QA问答
Q1:DNase I和RNase有什么区别?
A:DNase I主要降解DNA,RNase主要降解RNA。若实验目的是去除DNA污染,应使用DNase I;若需去除RNA,则选择RNase A等试剂。两者底物不同,不可互相替代。
Q2:DNase I反应为什么需要Mg²⁺和Ca²⁺?
A:Mg²⁺是DNase I催化活性必需的辅因子,Ca²⁺有助于维持酶结构稳定并减少自降解。若体系中加入EDTA等螯合剂,会显著降低或抑制DNase I活性。
Q3:如何终止DNase I反应?
A:可通过加入EDTA螯合金属离子、加热灭活、酚氯仿抽提或柱纯化等方式终止反应。具体方法需根据下游实验选择,避免残留酶或金属离子影响后续步骤。
Q4:DNase I会降解RNA吗?
A:DNase I对RNA的直接降解能力很弱,但在DNA-RNA杂交链中可切割DNA链。若用于RNA样品去DNA,建议选择低RNase活性的科研级产品,并在反应后去除DNase I。
Q5:DNase I溶液如何保存?
A:冻干粉通常可于-20°C干燥避光保存;酶溶液建议分装后-20°C或更低温度冻存,避免反复冻融。使用前可在冰上解冻,并根据实验体系确认活性。
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RNase A — 常用RNA酶,用于去除RNA污染。
蛋白酶K — 广谱蛋白酶,常用于核酸提取中灭活核酸酶。
EDTA二钠 — 金属螯合剂,可用于终止DNase I反应。
无RNase DNase I — 低RNase活性DNase I,适用于RNA样品处理。
Benzonase核酸酶 — 可降解DNA和RNA的非特异性核酸酶。
Micrococcal Nuclease — 微球菌核酸酶,常用于染色质可及性研究。
总RNA提取试剂盒 — 常与DNase I配合用于去除基因组DNA。
柱式DNA纯化试剂盒 — 用于DNase I处理后去除酶和反应产物。
MgCl₂溶液 — 为DNase I提供必需辅因子。
CaCl₂溶液 — 用于稳定DNase I活性。