5(6)-羧基二乙酸荧光素 N-琥珀酰亚胺酯试剂(5(6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,简称 5(6)-CFDA SE)是一种高活性的荧光衍生物。其分子结构包含二乙酸荧光素骨架和N-琥珀酰亚胺酯活性基团。在生理pH条件下,NHS酯能高效地与生物大分子(如蛋白质、抗体、多肽)上的伯胺基(-NH2)发生偶联反应,生成稳定的酰胺键,从而实现荧光标记。同时,其乙酰基结构使其具有细胞膜通透性,进入细胞后可被胞内酯酶水解并滞留,因此也常作为细胞增殖和迁移研究的示踪染料。
该试剂激发/发射波长约为490/520 nm(绿色荧光)。使用时通常需先溶于无水DMSO或DMF中配制母液,再加入到pH 7.2-9.0的缓冲体系中进行反应。由于对光敏感且易水解,建议避光、干燥、低温(-20℃)保存,并尽量现配现用。本品仅供实验室科学研究使用,不可用于人体或动物临床诊断与治疗。具体实验条件需根据研究对象优化。
QA问答
Q:5(6)-CFDA SE的主要反应基团是什么?
A:主要反应基团是N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS酯),它能特异性地与伯胺基团(如赖氨酸残基)反应。
Q:该试剂溶解后能长期保存吗?
A:不能。NHS酯在水溶液中极易水解失效,建议用无水DMSO或DMF溶解后分装,立即使用或低温短期保存,避免反复冻融。
Q:5(6)-CFDA SE标记后的产物稳定性如何?
A:标记形成的酰胺键在生理条件下非常稳定,不易解离,适合长时间的细胞追踪或体外检测实验。
Q:为什么名称中有“5(6)-"?
A:这是因为羧基取代在荧光素骨架的苯环上时,存在5位和6位两种异构体,市售产品通常为两者的混合物。
Q:该试剂可以用于活细胞染色吗?
A:可以。由于其乙酰化结构具有脂溶性,能穿透细胞膜,进入细胞后被酯酶水解成带电荷的荧光素衍生物而滞留在胞内,常用于细胞示踪。
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